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纤维素酶用于山茱萸提取初步探究 　 作者：王新胜，吴艳芳，黄年华 【摘要】 　　目的对酶法提取山茱萸总皂苷的酶解条件进行了初步研究，考察了酶解时间、酶用量、酶解温度和酶解初始pH值对总皂苷产量的影响。方法采用紫外可见分光光度法测定总皂苷含量，检测波长为554 nm。结果确定了酶解的最优条件为:酶解时间为150 min,酶量为5 U/g，酶解温度为45℃，酶解初始pH=5.4。结论酶法能显著提高山茱萸总皂苷的提取率。 【关键词】 山茱萸 纤维素酶 提取 　　Abstract：ObjectiveA new technology of extracting total saponins from Fructus Corni with cellulose enzyme was studied in this experiment. The influence of enzymolysis time, enzyme amount, enzymolysis temperature, and pH of the enzyme solution was studied. MethodsThe content of total saponins in Fructus Corni determined by UV-spectrophoto-metry with a detection wavelength at 554 nm. ResultsThe experiment showed an optimum process: enzymolysis time was 150 min，enzyme amount was 5U/g, enzymolysis temperature was 45℃ and pH of enzyme solution was 5.4. ConclusionThe extraction percentage of total saponins from Fructus Corni can be improved by cellulose enzyme treatment. 　　Key words：Fructus Corni; Cellulose enzyme； Extraction 　　山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc的干燥成熟果肉，具有补益肝肾、涩精固脱的功能［1］。化学成分分析表明，山茱萸果实中含有大量维生素、各种氨基酸、环烯醚萜苷类、皂苷、熊果酸、齐墩果酸等药用及营养保健成分［2］。近年研究发现山茱萸总皂苷具有较强的免疫抑制作用，是山茱萸作为免疫抑制的主要有效成分［3］。为了提高山茱萸总皂苷的利用率，充分发挥其功效，人们研究了许多山茱萸总皂苷的提取方法［4～6］。这些传统方法在一定的程度上提取了总皂苷，但效果不尽理想。目前，酶法已广泛应用于植物有效成分的提取中，并已显示出其优越性。本文把纤维素酶用于山茱萸提取的研究，现报道如下。 　　1 材料与仪器 　　纤维素酶，购于北京双旋微生物培养基制品厂；人参皂苷Re购于中国药品生物制品检定所；冰醋酸，莱阳市双双化工有限公司，高氯酸，天津市东方化工厂，香草醛、甲醇，天津市富宇精细化工公司，试剂均为分析纯；山茱萸药材，产地河南洛阳地区，经鉴定均来源于山茱萸科植物的成熟果实；上海精密仪器厂722型分光光度计。 　　2 方法 　　2.1 山茱萸中总皂苷提取工艺称取山茱萸原料5.000 g，置于100 ml圆底烧瓶中，酶解，反应一定时间后取出趁热过滤，收集滤夜，浓缩蒸干后，用甲醇溶解定容10 ml容量瓶中，作为储备液，备用。 　　2.2 含量测定吸取“2.1”项下的储备液10μl于具塞试管中，70℃水浴蒸干，精密加入0.2 ml 50 g·L-1香草醛冰醋酸溶液和0.8 ml高氯酸，振摇混匀后于65℃水浴加热20 min，冰水冷却5 min，加冰醋酸5 ml摇匀，以相同试剂为空白对照，在波长554 nm处测定吸光度，以标准曲线法计算总皂苷含量。 　　3 结果与讨论 　　3.1 标准曲线的绘制及线形范围精密称取人参皂苷Re对照品5.000 mg，以甲醇溶解并定容于5 ml容量瓶中，配制成1 mg/ml的对照品溶液。分别精密吸取该溶液50，70，100，150，170，200，250 μl，置10 ml具塞试管中，按“2.2”项下操作。以吸光度对浓度进行回归，方程为A=16.084C-0.013，相关系数r=0.999 8。表明总皂苷在0.008 3～0.041 7 mg/ml的浓度呈良好的线性关系。 　　3.2 酶法回流提取与直接回流提取的比较称取5 g山茱萸粉末两份，加十倍量的95%乙醇，一份加1 g 左右的纤维素酶，调pH值5