线栓法大脑中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注鼠模型脑水肿及脑.docVIP

线栓法大脑中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注鼠模型脑水肿及脑 　 作者：赵涓涓　柯国平　汤俊　黄娟　黎莉 【关键词】 大脑中动脉闭塞；局灶性脑缺血/再灌注；脑水肿； 　　摘要：目的：探讨短暂性右侧大脑中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注模型的脑梗死比和脑水肿的变化。方法：线栓法制作大鼠脑缺血/再灌注不同时间点模型，行TTC染色测量脑梗死比及干湿称重法测量脑含水量。 结果：脑缺血再灌注6h时大鼠脑组织即有含水量的增加，并随着时间的推移呈上升趋势，且未损伤侧中段脑组织含水量升高最为显著。TTC染色在缺血再灌注6h即可见白色梗死灶，梗死比在再灌注72h内逐渐增加。 结论：局灶性脑缺血再灌注72h内脑梗死比和脑水肿均呈进行性加重。 关键词：大脑中动脉闭塞；局灶性脑缺血/再灌注；脑水肿； 　　脑梗死比缺血性脑损伤（ischemia brain injury）是危及患者生命的疾病之一。而脑缺血及再灌注引起的脑水肿（hydrocephalus）是影响病人急性期与亚急性期生存的重要因素。较大面积的缺血因脑水肿致病变脑组织体积急剧增大，可诱发脑疝。缺血后的脑水肿被认为是加重脑缺血原有病变，导致脑疝及危及患者生命的主要原因［1~3］。另外，血脑屏障（bloodbrain barrier, BBB）破坏也是缺血性中风继发出血的原因，而这也是患者死亡的原因之一。目前缺血后BBB破坏引起血管源性脑水肿（vasogenic brain edema, VBE）及其对缺血病变进展的影响尚未引起足够的重视。本实验旨在进一步明确局灶性脑缺血再灌注后脑水肿的时程变化，为临床诊治提供参考资料。 1材料与方法 11实验动物与材料 SD大鼠56只（由武汉大学医学院动物实验中心提供），SPF级，雄性，体重280～320g。随机分为空白组（n＝8）、假手术组（n＝8）和缺血再灌注组2h、6h、12h、24h、48h每组各8只。尼龙线为上海申丁实业有限公司生产，TTC为Amresco公司（美国）生产。其余试剂均为市售。 12栓线的制备 采用6cm长3/0单股尼龙线，用记号笔在双侧距头端18mm、20mm和22mm点分别作标记，然后浸入肝素钠（12500单位）中浸泡30min后晾干备用。 13右侧大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion, MCAO）局灶性脑缺血再灌注改良模型的建立 采用longa法，略有改良。采用10％水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，颈部正中略偏右侧长约2cm的竖直切口，沿胸锁乳突肌内侧缘分离出右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。用6/0丝线结扎CCA近心端和ECA起始端，在CCA远心端和ICA起始端各置6/0丝线备用，用眼科剪在CCA近心端和远心端之间距离颈总动脉分叉约5mm处剪一个小口，经CCA插入3/0尼龙线至大脑中动脉起始段，插入深度为19.5±0.5mm；术中维持体温37.0±0.5℃。术后两小时用乙醚再次麻醉老鼠后将尼龙线轻轻拔退约1cm，此时记为再灌注0h。假手术插线深度为10mm，余同实验组。空白组不作任何处理。术后单笼饲养，进食颗粒食物。剔除术中出血较多、呼吸困难、取脑时有蛛网膜下腔出血及提前死亡的大鼠。 14神经功能缺损评分 动物缺血2h待苏醒后,按ZeaLonga方法评定神经功能缺损现象。0分:无任何神经功能缺失体征；1分:未损伤侧前肢不能伸展；2分:向未损伤侧行走；3分:向未损伤侧转圈成追尾状；4分:意识障碍,无自主行走［4］。动物评分在1～3 分之间为造模成功,否则弃之不用。 15红四氮唑（TTC）染色确定梗死效果 每组取4只大鼠麻醉后迅速断头取脑，从前额极开始行冠状切片，片厚约2cm，置入2％TTC水溶液中，37℃避光孵育30min后，用眼科镊分离白色区(梗死区)和红色区(正常区) ,分别称取重量,计算梗死比。梗死比( %) = 白色区重量/(白色区重量+ 红色区重量)［5］。 16脑含水量的测定 剩余每组大鼠在相应时间点麻醉后断头取脑，以视交叉前2mm和乳头体为标志冠状切为前、中、后三段，每段分为健侧和患侧。万分之一电子分析天平称取脑湿重,置100 ℃烤箱中烘烤至恒重（即两次测量重量相同）时称取脑干重,按公式:脑组织含水量= (湿重- 干重) / 湿重,测算出脑组织的含水量［6］。 17统计学处理 组间行单因素方差分析，经SPSS统计软件处理。 2结果 21神经病学表现 缺血组所有动物在麻醉清醒后均出现不同程度的偏瘫，缺血再灌注组每只大鼠在麻醉清醒后均出现左前肢不能伸展，其中15只大鼠出现向左侧行走的症状，18只大鼠出现向左侧转圈的症状，平均评分为2.28分；而假手术组和空白组未出现任何神经功能缺损症状，平均评分为0