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细胞毒素相关蛋白及幽门螺杆菌致病相关性探究 　 作者：吕爱民,金程,唐旭华,季布,陈荣惠,翁树秋 【关键词】 幽门螺杆菌 【摘要】 目的 研究细胞毒素相关蛋白与幽门螺杆菌（Hp）致病的相关性。方法 调查114例胃镜受检者的Hp感染率，应用血清ELISA技术检测了Hp菌株中细胞毒素相关蛋白（Cag A）阳性数，并对该蛋白与慢性胃病的关系进行了初步分析。结果 54例Hp阳性者中，Cag A阳性25例，阳性率46.3％；胃炎、十二指肠溃疡和胃癌组织Cag A阳性率分别为27.3%、71.4%和85.7％(P＜0.01)。Cag A阳性菌株感染者胃黏膜的炎症程度、活动度及萎缩、肠化与淋巴滤泡形成数均高于阴性者。结论 证实Cag A在Hp致病中的重要作用。 　　【关键词】 幽门螺杆菌；细胞毒素相关蛋白；致病性 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是人类最常见的一种慢性致病菌，感染了世界上超过50％的成年人，但并非所有的阳性者都有胃部症状或病变，Hp的基因多态性与其致病性的关系目前已受到了普遍的重视，毒素相关蛋白（Cag A）抗原是研究较多的一种。为了更深入地了解该菌的致病机制，本研究调查了我国南方Hp菌株中Cag A阳性数的比例及与胃部疾病的相关性。 　　1 材料与方法 　　1.1 病人与取材 　　1.1.1 病人 　　本组114例胃镜受检者来自我院胃镜室，男73例，女41例；平均年龄46．3岁(17～67岁)。排除孕妇和受检前2周内服用抗生素和有胃出血者。 　　1．1．2 胃镜检查与取材 　　常规胃镜检查，观察胃十二指肠病变，主要包括红斑渗出、糜烂、溃疡和胃癌。从胃窦取材进行Hp检测。 　　1．2 Hp检测每例患者均进行以下试验 　　1．2．1 快速尿素酶试验 　　应用自制试剂，24h变色者判断为阳性。 　　1．2．2 血清ELISA技术 　　应用自制的超声粉碎抗原ELISA检测药盒，抗原包被浓度为30μg/孔，血清稀释度为1∶100，阳性限为0．791(492nm OD值)。 　　1．2．3 细菌分离培养 　　胃窦取材，Skirrow选择性培养基37℃微氧培养5天分离Hp菌。 　　1．2．4 病理染色 　　胃窦部组织1块，常规制作病理切片，Giemsa染色镜检，菌量判定标准如下：（+）:Hp累及少于5个胃小凹，单个胃小凹中菌量少于10个；（++）：Hp累及少于5个胃小凹，单个小凹中菌量多于10个；（+++）：Hp菌累及多于5个胃小凹。 　　1．2．5 呼气试验(UBT) 　　采用微剂量(1μCi)14C― UBT检测试剂盒进行(深圳养和生物科技有限公司)，阳性限为200dpm。 　　1．2．6 Hp判断 　　细菌培养阳性和病理染色中有以上典型形态细菌者为阳性，培养阴性而病理菌量少于（+）或形态不典型者需合并UBT、RBT、ELISA任一阳性者判断为阳性。 　　1．3 Cag A检测 　　应用上海晶莹生物技术有限公司生产的克隆纯化Cag A包被ELISA反应板，按常规ELISA技术对 Hp阳性患者血清进行抗体检测，阳性限为说明规定的阴性对照吸光值(450nm)+0.40。 　　　1．4 组织学 　　胃活检组织病理切片常规HE染色镜检，计量观察组织学病变情况：（1）炎症程度：以上皮内出现淋巴细胞或浆细胞浸润为特征，（+）为表浅少量；（+++）为十分密集并深入黏膜深部；（++）时细胞浸润程度介于（+）与（+++）之间。（2）炎症活动度：以粒细胞出现为特征，（+）散在间质，（++）伴上皮内浸润，（+++）密集或形成腺隐窝脓肿，1个（+）计为1分，进行定量分析。 　　1．5 统计学方法 　　计算Cag A阳性菌株比率，并探讨该类菌株与不同胃疾病的相关关系。 　　2 结果 　　2．1 Hp阳性率与Cag A阳性比例 　　114例就诊者中Hp阳性数为54例，阳性率为 47．4％，54例Hp阳性者中Cag A阳性25例，阳性率 46．3％。 　　2．2 Hp感染及Cag A阳性株胃镜下病变的关系 　　见表1。表1 不同病变的Hp感染及Cag A阳性情况 例（略）注：*P＜0．01，△P＜0．05 　　2．3 Cag A阳性情况与胃黏膜组织学病变的关系 　　Cag A与胃黏膜炎症积分关系的定量分析见表 2，Hp阳性者与胃黏膜癌前病变关系见表3。表2 Cag A与胃黏膜炎症积分(均值)的关系（略）　表3 Hp阳性者Cag A状态与胃黏膜癌前病变的关系 （略） 　　3 讨论 　　Hp的毒素是近来备受关注的致病因子，主要包括两种，一种是分子量为90kD的空泡样变毒素，另一种是分子量约120～140kD的Cag A，后者也是Hp分型中的一个重要指标。Cag A阳性菌的致病作用较阴性者强［1,