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老鼠簕对四氯化碳性致肝纤维化大鼠治疗机制探究
老鼠簕对四氯化碳性致肝纤维化大鼠治疗机制探究
作者:梅燕 林军 侯软玲 刘林
【摘要】 目的研究老鼠簕对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGFβ1)与Smad3 mRNA表达的影响。方法Wistar大鼠随机分成5组:空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇浸膏低剂量组和老鼠簕乙醇浸膏高剂量组。除空白对照组外,其余4组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型。秋水仙碱组、老鼠簕乙醇浸膏低剂量组和老鼠簕乙醇浸膏高剂量组分别于4周后给予相应的药物,空白对照组给予等容量的生理盐水,1次/d。8周后处死大鼠,RT-PCR检测肝组织中TNF-α,TGFβ1 与Smad3 mRNA的表达。结果与空白对照组相比,模型对照组TNF-α,TGFβ1 与Smad3 mRNA表达增强(0.23±0.18vs0.49±0.28,0.29±0.16vs1.79±2.13, 0.52±0.36vs0.99±0.53,Plt;0.01);老鼠簕乙醇浸膏高、低剂量组(2.0,1.0 g·kg-1)较模型对照组TNF-α,TGFβ1 与Smad3 mRNA表达减弱(1.0 g·kg-1:0.29±0.21vs0.49±0.28,0.62±0.44vs1.79±2.13, 0.59±0.34vs0.99±0.53,Plt;0.05;2.0 g·kg-1:0.16±0.13vs0.49±0.28,0.66±0.51vs1.79±2.13, 0.53±0.41vs0.99±0.53,Plt;0.05)。结论老鼠簕能够抑制大鼠肝纤维化肝组织TNF-α,TGFβ1 与Smad3mRNA的表达。
【关键词】 肝纤维化 老鼠簕 肿瘤坏死因子α 转化生长因子β1 Smad3
老鼠簕Acanthus ilicifolius Linnseus是一种生长在热带海岸地带的红树林植物,属爵床科(Acanthaceae)老鼠簕属Acanthus。老鼠簕收录于《全国中草药汇编》,全株或根入药,具有清热解毒、消肿散结、止咳平喘之功效,主治淋巴结肿大、急慢性肝炎、肝脾肿大、胃痛、咳嗽、哮喘[1]。
肝纤维化的形成机制是细胞外基质(ECM)的合成和降解失调。肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肝纤维化始动激活及调控中具有重要作用;转化生长因子β1(TGFβ1)是导致肝纤维化的最重要的细胞因子, 其作用的发挥和细胞内信号转导蛋白Smad 密切相关。其中,Smad3是介导TGFβ1诱导肝纤维化的关键分子。本实验观察老鼠簕治疗大鼠实验性肝纤维化的疗效,研究大鼠肝组织TNF-α、TGFβ1 与Smad3 mRNA的表达情况,探讨老鼠簕对大鼠肝纤维化的治疗机制。
1 材料
1.1 动物清洁级Wistar大鼠60只,体重(180±20) g,由广西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药品及配制老鼠簕乙醇浸膏由本课题实验组提取。取100 g老鼠簕乙醇浸膏,用单蒸水配制成高剂量浓度为0.2 g(相当于生药材46.60 g)·ml-1的药液;取50 g老鼠簕乙醇浸膏,用单蒸水配制成低剂量浓度为0.1 g·ml-1的药液。 -4℃保存备用,使用前摇匀;秋水仙碱(西双版纳股份药业有限责任公司,批号:060717),用单蒸水配制成浓度为0.040 mg·ml-1的药液。
1.3 试剂四氯化碳(上海化学试剂公司,批。Trizol总RNA提取试剂盒(美国Invitrogen);RT-PCR逆转录试剂盒(美国Fermentas);无水乙醇(成都市科龙化工试剂厂,批;三氯甲烷(重庆川江化学试剂厂,批,异丙醇(成都市科龙化工试剂厂,批。
2 方法
2.1 建立大鼠肝纤维化模型[2]及给药方法60只Wistar大鼠随机分为5组:空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇浸膏高剂量组和老鼠簕乙醇浸膏低剂量组。每组12只。除了空白对照组外,其余各组大鼠第1次皮下注射40%CCl4植物油溶液0.05 ml·kg-1,以后每周2次皮下注射40%CCl4植物油溶液0.03 ml·kg-1。空白对照组仅皮下注射等体积植物油。连续8周。在注射四氯化碳4周后,秋水仙碱组以0.4 mg·kg-1、老鼠簕乙醇浸膏高、低剂量组分别以2.0,1.0 g·kg-1,用等容量给药法按10 ml·kg-1灌胃,1次/d。空白对照组和模型对照组给予等容量的生理盐水。连续4周。
2.2 标本采集所有大鼠于第8周末处死,取肝左叶组织1块,于-70℃保存。
2.3 肝组织TNF-α、TGFβ1 与Smad3 mRNA的表达测定Trizol提取大鼠肝组织总RNA,方法按试剂盒说明书操作,用紫外分光光
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