老鼠簕对四氯化碳性致肝纤维化大鼠治疗机制探究.doc

老鼠簕对四氯化碳性致肝纤维化大鼠治疗机制探究 　 作者：梅燕 林军 侯软玲 刘林 【摘要】 　　目的研究老鼠簕对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGFβ1）与Smad3 mRNA表达的影响。方法Wistar大鼠随机分成5组：空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇浸膏低剂量组和老鼠簕乙醇浸膏高剂量组。除空白对照组外，其余4组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型。秋水仙碱组、老鼠簕乙醇浸膏低剂量组和老鼠簕乙醇浸膏高剂量组分别于4周后给予相应的药物，空白对照组给予等容量的生理盐水，1次/d。8周后处死大鼠，RT-PCR检测肝组织中TNF-α，TGFβ1 与Smad3 mRNA的表达。结果与空白对照组相比，模型对照组TNF-α，TGFβ1 与Smad3 mRNA表达增强（0.23±0.18vs0.49±0.28，0.29±0.16vs1.79±2.13, 0.52±0.36vs0.99±0.53，Plt;0.01）；老鼠簕乙醇浸膏高、低剂量组（2.0，1.0 g·kg-1）较模型对照组TNF-α，TGFβ1 与Smad3 mRNA表达减弱（1.0 g·kg-1：0.29±0.21vs0.49±0.28，0.62±0.44vs1.79±2.13, 0.59±0.34vs0.99±0.53，Plt;0.05；2.0 g·kg-1：0.16±0.13vs0.49±0.28，0.66±0.51vs1.79±2.13, 0.53±0.41vs0.99±0.53，Plt;0.05）。结论老鼠簕能够抑制大鼠肝纤维化肝组织TNF-α，TGFβ1 与Smad3mRNA的表达。 【关键词】 肝纤维化 老鼠簕 肿瘤坏死因子α 转化生长因子β1 Smad3 　　老鼠簕Acanthus ilicifolius Linnseus是一种生长在热带海岸地带的红树林植物，属爵床科（Acanthaceae）老鼠簕属Acanthus。老鼠簕收录于《全国中草药汇编》，全株或根入药，具有清热解毒、消肿散结、止咳平喘之功效，主治淋巴结肿大、急慢性肝炎、肝脾肿大、胃痛、咳嗽、哮喘［1］。 　　肝纤维化的形成机制是细胞外基质（ECM）的合成和降解失调。肿瘤坏死因子α（TNF-α）在肝纤维化始动激活及调控中具有重要作用；转化生长因子β1（TGFβ1）是导致肝纤维化的最重要的细胞因子, 其作用的发挥和细胞内信号转导蛋白Smad 密切相关。其中，Smad3是介导TGFβ1诱导肝纤维化的关键分子。本实验观察老鼠簕治疗大鼠实验性肝纤维化的疗效，研究大鼠肝组织TNF-α、TGFβ1 与Smad3 mRNA的表达情况，探讨老鼠簕对大鼠肝纤维化的治疗机制。 　　1 材料 　　1.1 动物清洁级Wistar大鼠60只，体重（180±20） g，由广西医科大学实验动物中心提供。 　　1.2 药品及配制老鼠簕乙醇浸膏由本课题实验组提取。取100 g老鼠簕乙醇浸膏，用单蒸水配制成高剂量浓度为0.2 g（相当于生药材46.60 g）·ml-1的药液；取50 g老鼠簕乙醇浸膏，用单蒸水配制成低剂量浓度为0.1 g·ml-1的药液。 -4℃保存备用，使用前摇匀；秋水仙碱（西双版纳股份药业有限责任公司，批号：060717），用单蒸水配制成浓度为0.040 mg·ml-1的药液。 　　1.3 试剂四氯化碳（上海化学试剂公司，批。Trizol总RNA提取试剂盒（美国Invitrogen）；RT-PCR逆转录试剂盒（美国Fermentas）；无水乙醇（成都市科龙化工试剂厂，批；三氯甲烷（重庆川江化学试剂厂，批，异丙醇（成都市科龙化工试剂厂，批。 　　2 方法 　　2.1 建立大鼠肝纤维化模型［2］及给药方法60只Wistar大鼠随机分为5组：空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇浸膏高剂量组和老鼠簕乙醇浸膏低剂量组。每组12只。除了空白对照组外，其余各组大鼠第1次皮下注射40%CCl4植物油溶液0.05 ml·kg-1，以后每周2次皮下注射40%CCl4植物油溶液0.03 ml·kg-1。空白对照组仅皮下注射等体积植物油。连续8周。在注射四氯化碳4周后，秋水仙碱组以0.4 mg·kg-1、老鼠簕乙醇浸膏高、低剂量组分别以2.0，1.0 g·kg-1，用等容量给药法按10 ml·kg-1灌胃，1次/d。空白对照组和模型对照组给予等容量的生理盐水。连续4周。 　　2.2 标本采集所有大鼠于第8周末处死，取肝左叶组织1块，于-70℃保存。 　　2.3 肝组织TNF-α、TGFβ1 与Smad3 mRNA的表达测定Trizol提取大鼠肝组织总RNA，方法按试剂盒说明书操作，用紫外分光光