肺靶向穿心莲内酯脂质体制备及体外释放特征.docVIP

肺靶向穿心莲内酯脂质体制备及体外释放特征 　摘　要：目的 研究肺靶向穿心莲内酯脂质体的制备方法并考察其体外释药性质。方法　采用薄膜-冻融法制备穿心莲内酯脂质体；高效液相色谱法测定包封率；用透析法考察药物体外释放性质。结果 制得的脂质体平均粒径为6.325μm，包封率大于75%，稳定性好。药物体外释放符合Higuchi方程。结论 采用薄膜-冻融法可制得具有较高包封率及稳定性的穿心莲内酯脂质体，有助于提高穿心莲内酯的肺靶向性。 关键词：穿心莲内酯；脂质体；肺靶向 　　穿心莲内酯(andrographolide )是中药穿心莲的主要有效成分，具有解热、抗炎、抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用[1,2]。但是此药物不溶于水，微溶于乙醇等有机溶剂且脂溶性较差，所以体内吸收缓慢，生物利用度低。目前改善穿心莲内酯生物利用度低的方法主要有，穿心莲内酯-聚乙二醇(PEG)固体分散体[3]，穿心莲内酯分散片，环糊精包合穿心莲内酯[4]等。本实验采用薄膜蒸发法-冻融法制备穿心莲内酯脂质体。从制剂的角度来说，脂质体与肺泡组织具有很好的生物相容性，不易引起局部免疫性反应；药物包封于脂质体中能降低药物的毒性，有效减少药物对肺部及呼吸道的刺激；同时脂质体能降低药物的消除速率，增加药物体内外稳定性，对于穿心莲内酯而言能保护其内酯环结构的完整，从而延长药物作用时间[5-7]。因此，脂质体比其他载体系统更适合肺部给药。 　1 材料与方法 　1.1仪器与试剂 　WFZ-26A型紫外可见分光光度计(天津光学仪器厂)；P230 型高效液相色谱仪及 EC2000 型色谱工作站(大连依利特仪器有限公司)；SHA-C型水浴恒温振荡器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司；JEM-100CX-Ⅱ电子透射显微镜（日本电子）；ZFQ85A旋转蒸发仪(上海医械专机厂)； 3K30超速冷冻离心机(Sigma公司)。 论文代写 　穿心莲内酯原料药(四川文龙药业)，穿心莲内酯标准品(中国药品生物制品检定所)，蛋黄卵磷脂(德国Lipoid公司)，胆固醇((上海政翔化学试剂研究所)，乙腈为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂均为市售分析纯。 　1.2 脂质体的制备 　采用薄膜蒸发法-冻融法制备穿心莲内酯脂质体[8]。精密称取卵磷脂、胆固醇、十八胺和穿心莲内酯适量,用氯仿溶解后置于500mL茄形瓶中，38℃旋转蒸发除去有机溶剂后，加入5%甘露醇溶液， 38℃水浴常压下水合60 min，使得薄膜溶胀水化，所得的混悬液于-18℃冰箱冷冻过夜后取出，于室温下完全融化，如此重复冻融3次，即得穿心莲内酯脂质体溶液，于4℃冰箱保存备用。 　1.3穿心莲内酯脂质体的形态和粒径分布 　量取上述制备脂质体混悬液，稀释至适宜浓度，滴在专用铜网上，用2%磷钨酸负染色，晾干后置于电子显微镜下观察纳米粒的形态并进行粒径测定；并运用跨距（Span）来表示粒径分布的宽窄状况。 　1.4穿心莲内酯测定方法 　采用反相HPLC法测定穿心莲内酯的含量，色谱柱： DiamonsilTMC18柱(4.6 mm×200 mm, 5μm)；流动相：甲醇-水(70∶30 )；检测波长：225 nm；进样量：10μL；流速： 1.0 mL/min-1；柱温：室温。精密称取穿心莲内酯对照品5mg，用甲醇溶解并定容至50ml，得100μg/ml的贮备溶液。用甲醇稀释得系列浓度对照溶液(0.5、1、5、10、25、50、75μg/ml)。按上述色谱条件进样测定。 　1.5 脂质体包封率和载药量的测定 　取穿心莲内酯脂质体混悬液0.5 mL，置5 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，振摇混匀，过滤，取滤液进样，测定脂质体混悬液中总的药物浓度。 　取穿心莲内酯脂质体混悬液2.0 mL，置超速离心机中，离心2.5h后，取上清液进样，测定混悬液中游离药物浓度。根据混悬液中总的药物浓度和游离的药物浓度计算出脂质体的包封率和载药量。 　1.6脂质体体外释放实验 　取制备好的脂质体混悬液3批，分别吸取适量移入已处理好的透析袋中，将透析袋两端扎紧，置于盛有100ml 磷酸盐缓冲液PBS(pH=7.4)的广口瓶中，于37℃±0.5℃温度水平下，在水平恒温振荡器(100r·min-1)中振荡。开始计时，取样时间间隔以保证漏槽状态为宜，定期取样5 ml同时补加5 ml空白PBS，测定不同时点样品上清液的药物浓度，以累计释放量（或者释放率）和时间拟合方程。 　1.7 稳定性考察　 　取穿心莲内酯脂质体混悬液3批,在(10±2)℃条件下放置6个月，于试验期间的0，1，2，3和6个月末取样。分别考察外观、含量、包封率和粒径的变化。 　2 结果 　2.1脂质体的一般性质 　制得的脂质体为圆球形，表面较光滑，不粘连，分散良好，大小均匀，平均粒径为6.325μm；根据跨