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肾气丸“阴中求阳”配伍对桂皮醛含量影响 　 作者：李政木 陈炜璇 卓廉佳 吴勇 【摘要】 目的测定桂皮醛在肾气丸各拆方组水煎液中的含量，分析肾气丸“阴中求阳”配伍对桂皮醛含量的影响。方法将肾气丸组方药物拆方分为补阳组1、补阳组2、补阴组1、补阴组2、阴阳双补组1和阴阳双补组2（即肾气丸全方），采用高效液相色谱法测定各肾气丸拆方组水煎液中桂皮醛的含量。结果阴阳双补组2水煎液中桂皮醛含量高于补阳组2和阴阳双补组1，阴阳双补组1和补阳组2水煎液中桂皮醛含量高于补阳组1，且都具有统计学意义。结论肾气丸“阴中求阳”配伍能增大水煎液中桂皮醛的含量，且肾气丸中的“三泻”药物（茯苓、泽泻、丹皮）也有增强此作用的趋势。 【关键词】 肾气丸 阴中求阳 桂皮醛 高效液相色谱法 肾气丸始载于《金匮要略》，由桂枝、附子、干地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮组成，有温补肾阳之功效，是临床治疗肾阳虚证的名方。其“阴中求阳”的组方原理，即在大量滋阴补肾的药物中加入少量的附子、桂枝，是方剂现代研究中值得探讨的课题。本研究将肾气丸的组方进行拆分，以桂枝的主要有效成分桂皮醛为指标，测定各肾气丸拆方组水煎液中桂皮醛的含量，并比较其含量变化。现报道如下。 1 仪器与试剂 1.1 仪器DIONEX P680 高效液相色谱仪；UVD170U型紫外可见光检测器；Chromeleon工作站；分析天平；超声清洗仪。 1.2 试剂无水乙醇，乙醚，甲醇（色谱纯），其他试剂均达到色谱分析要求。 1.3 对照品桂皮醛（中国药品生物制品检定所，批号为110710200212）。 1.4 药材桂枝、附子、干地黄、山药、山茱萸、茯苓、泽泻、牡丹皮均由广州中医药大学中药鉴定教研室张丹雁教授鉴定为正品。 2 方法与结果 2.1 拆方分组将肾气丸组方药物分为补阳组1：附子、桂枝；补阳组2：附子、桂枝＋茯苓、泽泻、丹皮；补阴组1：干地黄、山茱萸、山药；补阴组2：干地黄、山茱萸、山药＋茯苓、泽泻、丹皮；阴阳双补组1：附子、桂枝＋干地黄、山茱萸、山药；阴阳双补组2：即肾气丸全方。其中含有桂枝的组有：补阳组1，补阳组2，阴阳双补组1，阴阳双补组2。 2.2 高效液相色谱条件 色谱柱 DiomonsilTM C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；柱温为室温；流动相为甲醇-水（60：45），流速1 ml/min；检测波长310 nm；进样量10 μl。 2.3 标准曲线制备 精密称取桂皮醛对照品17.2 mg，置50 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度（每毫升含桂皮醛0.344 mg），作为对照品储备溶液。分别精密量取对照品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml，置25 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制得桂皮醛标准溶液，取上述标准溶液，按“2.2”项下色谱条件分别进样10μl测定，以桂皮醛标准品液浓度为横坐标（C），峰面积为纵坐标（A），得回归方程A=0.840 7C- 0.263 3，r= 0.999，桂皮醛在5.504～19.264 μg/ml内线性关系良好，符合外标法定量测定要求。 2.4 供试品溶液的制备精密称取含桂枝4 g（以桂枝、附子、干地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮1：1：8：4：4：3：3：3的比例计算）各拆方组，浸泡30 min，煎煮60 min，得药液约15 ml，用乙醚萃取2次（15 ml/次），合并醚液，室温挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，用0.45 μm的有机微孔滤膜滤过，取续滤液即得。 　 2.5 精密度实验 取相同浓度对照品溶液，连续进样测定，根据所得峰面积计算，RSD = 1.15%，n=6。 2.6 稳定性实验取供试品溶液在室温下放置，每隔2 h测定1次，共测定6次，按测得峰面积积分值计算，供试品在10 h内稳定，RSD = 1.65%。 2.7 阴性对照实验 肾气丸全方按照含桂枝4 g的比例称取不含桂枝的其他药，按照上述供试品制备方法，制作阴性供试品溶液，用与样品相同的色谱条件测定，在与样品相同保留时间处无干扰峰。结果见图1～3。 图1 桂皮醛对照品HPLC色谱图 图2 肾气丸全方HPLC色谱图 图3 肾气丸缺桂枝阴性对照色谱图 2.8 样品测定按照含量测定方法测定各拆方组的样品，记录峰面积，计算桂皮醛在各拆方组中的含量，用SPSS统计软件进行分析。结果见表1，色谱图见图4～8。表1 样品含量测定结果（±s） 3 讨论 实验过程中流动相试用了甲醇水（30∶70）、甲醇水（45∶55）、甲醇水（50∶50）、甲醇水（60∶40）、甲醇水（70∶30）、甲醇水（60∶45）几个系统，以甲醇-水（60∶45）系统分离效果最优，各拆方组桂皮