细胞免疫分型的临床应用.PPTVIP

临床医学五年制 实验诊断学 续 薇 教 授 博士生导师 一、血细胞发育过程中形态演变的一般规律 血细胞发育规律 （1）细胞体积 胞体逐渐由大变小 （2）细胞质 ①量 ②颜色 ③颗粒 （3）细胞核 ①大小②染色质③核仁④核膜 （4）细胞核/细胞质 由大变小 二、血细胞的正常形态学特征 三、血细胞的细胞化学染色 1、过氧化物酶染色（POX） 临床意义 用于鉴别：急性白血病类型 急性淋巴细胞白血病（阴性） 急性粒细胞白血病 （强阳性） 急性单核细胞白血病（弱阳性或阴性） 3、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 临床意义 正常人：积分＜80（分） 鉴别慢性粒细胞白血病与类白血病 增高：急性化脓菌感染、类白血病反应、 急性淋巴细胞白血病；再生障碍性贫血。 减低：急性粒细胞白血病；病毒感染、阵发性睡眠性贫血。 临床意义 用于鉴别： 急性单核细胞白血病（强阳性） 急性粒细胞白血病（阴性或弱阳性） 临床意义 用于三种白血病类型鉴别 急性粒细胞白血病（阴性或弱阳性） 急性淋巴细胞白血病（阳性） 急性单核细胞白血病（阳性） 临床意义 诊断缺铁性贫血 指导铁剂治疗 四、细胞免疫分型 （一）检测方法 免疫荧光法 免疫酶染色法： APAAP（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶）法 PAP（过氧化物酶抗过氧化物酶）法 ABC（亲和素-生物素-酶复合物）法 1、流式细胞仪计数 原理：将标本细胞用荧光标记制备成悬液，使荧光标记的细胞一个个地通过仪器的毛细管，分别辨认细胞形态大小和荧光特征，称为荧光活化细胞分选法。其优势是可快速地对大量细胞进行多参数定量分析。 2、碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶桥联酶标法(APAAP) 原理： （1）特异性第一抗体（鼠抗人）单抗与标 本内的细胞抗原相结合、 （2）用第二（桥）抗体（兔抗鼠）与细胞抗原结合的第一抗体 结合、 （3）底物经酶作用、染色、脱水、透明、封片、镜检。 3、生物素－亲合素免疫细胞化学技术（ABC） 原理： （1）第一抗体为未标记的特异性抗体，能 与待测抗原结合。 （2）第二抗体为生物素化的桥抗体，能与第一抗体结合。 （3）第三抗体是结合了过氧化物酶的亲合素复合物（ABC）， （4）底物、显色、脱水、透明、封片、镜检。 识别不同系列的细胞 髓系：CD33，CD34 ，CD13，CD14 淋巴：CD4，CD8，CD10，CD19 巨核、血小板：CD41，CD42 红细胞：血型糖蛋白A/B 2. 识别不同的淋巴细胞： T细胞：CD4，CD8，CD2，CD3 B细胞：CD19，CD20，CD22 3. 识别T细胞亚群 全T细胞： CD4 ，CD8 TH细胞: CD4+,CD8- TS细胞: CD4-,CD8+ TSI细胞: 诱导抑制T细胞 CD29低密 度表达 THI细胞：诱导辅助T细胞 CD29高密度表达 4.识别不同分化阶段的细胞 如造血祖细胞标志、T、B淋巴细胞不同分化阶段 5. 识别不同功能状态的细胞 如记忆T细胞，活化T细胞 6. 对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究 7.各种白血病细胞的免疫表型分析 8.白血病微小残留病的检测 （三）急性白血病免疫表型特点 2.急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型特点 3. 急性髓细胞白血病的免疫学分类 五、细胞遗传学分析 要 点： 1、血细胞发育规律 2、正常血细胞形态特征 3、常用细胞化学染色的方法及临床意义 B-ALL + – – – + +/ – T-ALL – + – – –/+ + AML – –/+ + + + – CD19 CD7 CD33 CD13 HLA-DR TdT 1. ALL与AML细胞免疫表型特点 注：少数AML（10%）CD7可为阳性；少数AML（M1型）TdT可为阳性；少数T-ALL（10%）可为HLA-DR表达。 B系列 早期B型