结核分枝忏菌鼠李糖基转移-大连医科大学学报.PDF

第 26 卷第 4 期 大连医科大学学报 VoI. 26 No.4 2004 年 12 月 Joumal of Dalian Medical University Dec. 2004 结核分枝忏菌鼠李糖基转移 基因( wbbL)的克隆和表达 张果1 ，孙苟、1 ，梁明珠1 ，王超1 ，王冠1 ，葛新1 ， 4~ 强2 ，马郁芳2 (1.大连医科大学医疗系 2∞1 级，辽宁大连 116027; 2. 大连医科大学生物化学教研室，辽宁大连 116027) 摘要: [目的]从结核分枝杆菌基因组 DNA 中克隆鼠李糖基转移酶基因 (rhamnosyl transferase , wbbL) ，并利用 pET16b 表达载体在大肠杆菌 BL21(DE3) 菌株中高效表达 wbbL 基因产物-鼠李 糖基转移酶。[方法]利用 PCR 方法从结核分枝杆菌 H37Rv 菌株的基因组 DNA 中扩增出 wbbL 基因 (906 b ) 并克隆到 pMD18 - T 克隆载体中，经 DNA 序列测定证实为正确的基因后，将其亚 p 克隆到表达载体 pET16b 中并在大肠杆菌 BL21(DE3) 中表达 wbbL 基因产物。[结果J 1)从结核 分枝杆菌 H37Rv 菌株的基因组DNA 中 PCR 扩增出正确的 wbbL 基因; 2) 经 IPTC 诱导 wbbL 基 因在 BL21( DE3) 中高效表达出 wbbL 基因产物。[结论J 1)用具高保真性的 LA Taq DNA 聚合 酶所扩增的结核分枝杆菌的 wbbL 基因经 BLAST 分析与结核分枝杆菌基因组数据库 (http:// www.sanger.ac .uk) 中所公布的序列完全一致;2) 从大肠杆菌 BL21 (DE3) 所获得的大量鼠李糖 基转移酶，为进一步纯化该酶并研究其酶促反应动力学特性提供了物质保障。 关键词:结核分枝杆菌;鼠李糖基转移酶; wbbL 基因;基因克隆;基因表达 中图分类号: Q78 文献标识码:A 文章编号: 1671 -7295(2004)04 - 0265 - 04 结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tu- 验证明鼠李糖基转移酶是分枝杆菌生长所必需的 酶。因此，鼠李糖基转移酶可作为研发抗结核新药 berculosis) 所引起的侵害人类多器官系统的烈性传 染病，历史上曾严重威胁人类的生命健康[1] 。由于 的理想、靶标。为了建立体外筛选抗结核药物的分子 模型，作者首先要克隆编码结核分枝杆菌鼠李糖基 抗生素的发明，结核病一度得到了有效的控制。然 转移酶的 wbbL 基因，然后利用大肠杆菌高效表达 而，近年来，由于耐多药结核分枝杆菌菌株的出现， 鼠李糖基转移酶，为进一步研究该酶的酶促反应动 在全世界范围内结核病的发病率和死亡率都在显著 增加，研究新一代抗结核菌药物迫在眉睫[2 ， 3] 。结 力学及建立筛选抗结核药物的酶反应体系提供物质 保障。 核分枝杆菌的生存和繁殖均依赖于其细胞壁的完整 性，所以其细胞壁可以作为抗结核菌新药开发的靶 1 材料和方法 衔。对分枝杆菌细胞壁的深入研究表明，分枝杆菌 1. 1 菌种与质粒 的细胞壁核心部分主要由分枝菌酸、聚阿拉伯糖聚 半乳糖和肤聚糖 3 种成分组成，而前两者是通过 L