脂多糖体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2-4mRNA表达影响.docVIP

脂多糖体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4mRNA表达影响 　 作者：宋美芳，金沈锐，曾南，沈映君 【摘要】 目的探讨时间和剂量对脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4mRNA表达的影响。方法常规提取和培养小鼠腹腔巨噬细胞。时效实验，加入终浓度为1 μg/ml LPS，分别刺激1，3，6，12 h后取材;量效实验，分别加入终浓度为0.00，0.01，0.1，1，10 μg/ml LPS， 3 h后取材。小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA的表达采用RT-PCR进行。结果①在LPS 1μg/ml 剂量下6 h内，随着时间的延长，TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升，与空白对照组相比有显著性差异(Plt;0.05，Plt;0.01);但刺激时间达12 h时，细胞开始脱壁、死亡。② 在LPS 0.01～1 μg/ml 剂量范围内，随着LPS浓度的增加，TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升，呈一定剂量依赖关系，与空白对照组相比有显著性差异，(Plt;0.05或Plt;0.01);但当LPS浓度达10 μg/ml，TLR2/4 mRNA的表达量反而下降。结论用LPS体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞，在0.01～1 μg/ml浓度范围内，在1～6 h时间内，其TLR2/4 mRNA的表达呈现出一定的时效与量效关系，该研究可为今后的研究者提供有益的时间和剂量参考。 【关键词】 脂多糖; 腹腔巨噬细胞; Toll样受体2/4; 基因表达 　　Abstract：ObjectiveTo study the effect of LPS on the expression of mRNA of TLR2/4 of mouse peritoneal macrophage in vitro. MethodsMouse peritoneal macrophage were extracted and cultivated by routine， LPS(1 μg/ml) was used to stimulate peritoneal macrophage in vitro，then the expression TLR2/4 of mRNA were detected by RT-PCR at 1，3，6，12 h respectively. At the same time，LPS(0.001，0.01，0.1，1，10 μg/ml) was used to stimulate peritoneal macrophage in vitro，and the expressions were detected at 3 h point. Results①The expression of TLR2/4 mRNA in peritoneal macrophage was increased within 6 hs at the dosage of 1 μg/ml (P lt;0.01 or Plt;0.05)，but the expression was decreased at 12 h point; Within the dosage of 0.01～1 μg/ml，the expression of TLR2/4 mRNA in peritoneal macrophage was increased at 3-hour point(Plt;0.01;Plt;0.05)，but the expression decreased at the dosage of 10 μg/ml.ConclusionExpression of TLR2/4 mRNA in mouse peritoneal macrophage with LPS is correlated with time and dosage in vitro. Time is from 1 to 6 h, and dosage is from 0.01μg/ml to 1 μg/ml. 　　Key words： Lipopolysaccharide; Peritoneal macrophage; Toll-like receptors 2/4; Gene expression 　　脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可以激活巨噬细胞，促进其产生与释放许多活性物质，导致炎症反应的发生[1，2]。Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)[3]是近几年发现的一类天然免疫受体，有10种TLR家族成员，其中与LPS信号传导相关的主要是TLR2和TLR4。现有文献提示，小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA的表达随LPS刺激浓度及时间而变化，但目前的资料存在一定的模