脑宁康颗粒对脑缺血预适应大鼠HSP70表达影响实验探究.docVIP

脑宁康颗粒对脑缺血预适应大鼠HSP70表达影响实验探究 　【摘要】 目的观察中药脑宁康(NNK)颗粒对经脑缺血预适应(IPC)处理后大鼠HSP70表达的影响。方法根据Pulsinelli四管法及Liu法分别制作大鼠IPC及脑缺血再灌注( IR) 模型，应用免疫组化SP法作HSP70染色，比较NNK颗粒对IPC和IR 两种模型大鼠HSP70表达的影响，并以阿斯匹林作对照。结果NNK在两模型中均可使HSP70表达明显增强(Plt;0.05～0.01),且效应显著高于阿斯匹林(Plt;0.05)，但两模型之间比较无显著性差异。且NNK能够延缓HSP70表达强度的减弱。结论NNK颗粒通过增强IPC和缺血状态中HSP70表达，扮演了强化IPC及药物预适应角色，旨在增加脑神经细胞对缺血、缺氧的耐受力，并通过对HSP70的干扰，获得稳定神经细胞结构，维护其正常功能的药理效应。 【关键词】 脑宁康颗粒； 缺血预适应； 脑； HSP70 Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of Naoningkang particle on the expression of the 70KDa heat shock protein (HSP70) following the rats’ischemic precondition .MethodsThe rats’ IPC and ischemic reperfusion ( IR ) models were made by methods of Pulsinelli four tubes and Liu respectively. The expression of HSP70 in two rat models including IPC and IR were compared by NNK particle applying SP immunohistochemistry method. ResultsNNK particle could increase the HSP70 expression of IPC and in the state of ischemia and play the role on stronging ischemic precondition of IPC and medicine. The effect of NNK particle suggests increasing the tolerance of central nerve cells facing to ischemia and hypoxia. ConclusionNNK particle also can stabilize the structure of neuron through interfere with HSP70 expression , and then it demonstrate the pharmacologic effect of keeping the neuron normal functions. Key words：NNK particle; Ischemic preconditioning; Brain; HSP70 近年来，脑缺血预适应( ischemic preconditioning, IPC)过程中产生的机体重要保护因子热休克蛋白（Heat shock protein, HSP）已引起广泛关注。对整体和离体经应激作用后的细胞或组织的研究表明［1］，当细胞受到损伤时，均伴随HSP含量增加。因而，普遍认为HSP的功能主要是在于稳定细胞的结构，从而维护细胞的正常生理功能。在脑缺血损伤领域的研究显示，HSP具有保护脑细胞，增加脑细胞对缺氧的耐受性，明显降低神经元对谷氨酸毒性作用的敏感性［2］，从而抵抗神经元进一步致死性损伤的作用。本研究拟观察HSP70在IPC和脑缺血再灌注( ischemic reperfusion, IR ) 中的表达及脑宁康(NNK)对其的影响。 现报道如下。 1 材料与仪器 1.1 仪器多功能显微镜(OLYMPUS-269865,JAPAN)，电镜（JEM-1200EX,JAPAN），医用低温冷冻冰箱（SANYO,JAPAN），电子蠕动泵（LDB-M）。 1.2 试剂与药品鼠抗HSP70单克隆抗体（Neomarker Corporation, USA），链卵白素－生物素结合辣根过氧化酶，1∶300zymed,USA)，染色试剂盒（Labvision Corporation, USA）。NNK颗粒由山东中医药大学附属制剂厂生产，生药含量为5 g/g； 肠溶阿斯匹林(ASP)为沈阳克达