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芪参益气滴丸对急性心肌梗塞大鼠肿瘤坏死因子影响 　 作者：刘梅 杜武勋 朱明丹 宋启刚 魏营 冯利民 苏金玲 【摘要】 目的观察芪参益气滴丸对急性心肌梗塞（AMI）大鼠不同时间点肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法制备AMI模型大鼠，随机分成假手术组、AMI模型组、芪参益气滴丸治疗组〔3.5 mg/(100 g·d)芪参益气滴丸混悬液灌胃给药〕、卡托普利治疗组［1.012 5 mg/（100 g·d）卡托普利悬浊液灌胃给药］，每组又分4个时点(3 d、2周、4周、8周)，共16个组，每组9只。于实验结束后处死动物,分别取大鼠梗死区及非梗死区心肌检测TNF-α的mRNA表达水平。结果芪参益气滴丸治疗组与AMI组比较，在梗塞区和非梗塞区3 d时芪参益气滴丸治疗组TNF-α mRNA表达降低，2，4，8周时与AMI组同期比较降低，有显著性差异（Plt;0.05），但仍高于假手术组；卡托普利治疗组，在2，4，8周时，梗塞区和非梗塞区TNF-α mRNA表达与AMI组比较有所下降，两组之间有显著性差异（Plt;0.05）；芪参益气滴丸治疗组与卡托普利治疗组两组比较，芪参益气滴丸治疗组3 d，2周，4周，8周与同期卡托普利治疗组比较梗塞区TNF-α mRNA表达有显著性差异（Plt;0.05），芪参益气滴丸治疗组下降显著；在非梗死区3 d，2周卡托普利治疗组较芪参益气滴丸治疗组下降明显，4，8周时两组之间未显示出差异。结论 早期应用芪参益气滴丸可抑制AMI后炎症反应，减轻了心肌损伤程度，保护心脏功能。 【关键词】 芪参益气滴丸 急性心肌梗塞 肿瘤坏死因子 炎症反应 　　芪参益气滴丸主要成分为黄芪、丹参、三七、降香组成，具有益气通脉，活血止痛的功效，临床上广泛用于治疗心血管疾病。本研究通过建立大鼠急性心肌梗塞(AMT)模型，观察芪参益气滴丸对肿瘤坏死因子（TNF-α）的抑制作用，探讨其减轻AMI后心肌损伤的机制，为芪参益气滴丸防治AMI开辟更为广阔的应用前景。 1 材料和方法 1.1 动物 Wistar大鼠，雄性,体重200～290g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2007-0001。 1.2 药品、试剂及仪器 芪参益气滴丸药物，由天士力医药集团公司提供（批准文号：国药准字。卡托普利药物由施贵宝药品公司提供（批准文号：国药准字。TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver.3.0由宝生物工程（大连）有限公司提供。Trizol由Invitro Gen公司提供。主要仪器设备包括：PCR仪（Hybaid Limited Equipent class1，英国）、紫外分光光度计 uv－530（BECKMAN公司）、DDY-11B型三恒电泳仪（北京六一仪器厂）、凝胶成像系统 （英国 syngene公司）。台式低温高速离心机（BECKMAN公司）。 1.3 动物模型制备 按照文献方法［1］稍加改进,结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)建立AMI模型。手术前后均记录体表心电图，以Ⅱ导ST段弓背向上抬高0.2 mm以上为结扎成功的标志。另设假手术组36只，其方法除不结扎冠状动脉外，余操作与AMI模型组动物相同。于术后给予青霉素4万U，肌肉注射1次/d，共3 d。 1.4 分组及给药 24 h存活大鼠随机分为假手术组、AMI模型组、芪参益气滴丸治疗组、卡托普利治疗组，每组又分4个时点(3 d，2周，4周，8周)，共16个组，每组9只。芪参益气滴丸组大鼠实验前称取一定量的浸膏，用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成3.5 mg/(100 g·d)浓度的芪参益气滴丸混悬液，按3.5 mg/（100 g·d）给药。卡托普利组用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成1.0125 mg/ml浓度的悬浊液，按1.012 5 mg/（100 g·d）给药，AMI模型组、假手术组予以生理盐水灌胃，至实验结束。 1.5 心肌总RNA的提取和细胞因子的检测 1.5.1 心肌总RNA的提取于3 d、2周、4周、8周实验结束后处死动物,分别取大鼠梗塞区及非梗塞区心肌100 mg用Trizol法提取总RNA，提取的总RNA用紫外分光光度仪分别测定A260,A280数值，所测得RNA样品吸光度A260/A280为1.8～2.0。 1.5.2 RT-PCR方法检测mRNA的水平PCR具体步骤是： 94℃预变性2 min，PCR扩增35个循环(94℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸2 min)。PCR产物经2%琼脂糖电泳分析结果,用光密度扫描计算TNF-α与内参的比值。引物序列参照Genebank提供的cDNA序列,用Primer 5·0设计,由上海生物工程公司合成。TNF-