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草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选探究 　 作者：潘见欢 潘超美 陈良坚 黄崇才 赖珍珍 【摘要】 【目的】　探讨影响草珊瑚不定芽诱导的培养因素，为建立草珊瑚初代离体培养体系提供依据。【方法】以草珊瑚下胚轴诱导获得的无菌再生苗茎段为外植体，考察6苄氨基嘌呤(6BA)和吲哚丁酸(IBA)不同浓度配比、光照时间和强度以及温度对草珊瑚离体不定芽高频诱导的影响。【结果】6BA和IBA组合能有效提高草珊瑚不定芽的诱导率，而高浓度的植物激素会抑制草珊瑚不定芽的生长;草珊瑚在散射光或弱直射光照射下生长势头好，暗培养或过强直射光会出现植株发黄、皱缩、甚至死亡的现象;在温度为25℃时，草珊瑚不定芽诱导率达到100%，低于25℃或高于30℃均不利于其生长。【结论】以MS培养基为基本培养基，附加25mg/L 6BA+ 01mg/L IBA，温度为25℃，采用柔弱 自然 散射光或低于2000lx直射光照射，时间少于8h能有效促进草珊瑚离体不定芽的诱导，诱导率达8298%。 【关键词】 草珊瑚/生长和发育;　不定丛芽;　培养基，条件性 草珊瑚Sarcandra glabra( Thumb) Nakai ，属金粟兰科Chloranthaceae 草珊瑚属Sarcandra，又叫九节茶、肿节风、接骨木，为多年生草本或亚灌木。草珊瑚具消炎、清热、解毒和舒筋活血作用，临床用于 治疗 多种炎症。最新研究发现草珊瑚对肿瘤，尤其是急性白血病有一定治疗效果[1]。近年来草珊瑚已被开发成一系列药品和日用品，如草珊瑚口服液[2]、草珊瑚清口香[3]和草珊瑚注射液[4]等。随着开发利用的不断扩展， 忽视了对其资源的保护，致使野生资源遭受毁灭性的破坏，因此挽救草珊瑚种质资源的研究势在必行。目前对草珊瑚的研究主要集中在常规栽培、药材的组织鉴别以及化学成分组成的分析上，在离体快速繁殖方面的研究甚少。本文在建立草珊瑚离体快速繁殖培养体系研究的基础上，对草珊瑚的离体丛芽诱导培养进行了多方面考察，旨在为肿节风药材生产的源头——草珊瑚优质种苗(试管苗)繁育的规模化、产业化生产奠定基础。现报道如下。 　 　1　材料与方法 　　11　药材　试验药材采自广州帽峰山野生草珊瑚，经广州中医药大学药用植物学教研室潘超美教授鉴定，确认为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thumb)Nakai。取其种子，经消毒后在无菌条件下诱导萌发，切取胚和下胚轴诱导获得无菌丛芽和再生植株，以无菌再生苗的茎段作为诱导不定芽的材料(图1)。 　　12　主要仪器与试剂　6苄氨基嘌呤(6BA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号;吲哚丁酸(IBA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号;琼脂粉由湛江新台兴海洋生物制品有限公司生产(批号：2007818);其他试剂均为化学纯;DLCJ1F型单人双面超净工作台由哈尔滨东联 电子 技术有限公司提供;YXQ SGD型全自动高压灭菌锅由广东医疗器械厂提供;XS125A型电子分析天平由瑞士Sartorius公司提供。LRH300G型生物光照培养箱由广东医疗器械厂提供。表1　丛芽诱导培养基的L16(45) 正交试验设计 毕业论文 　　13　多种影响因子的筛选[5]　采用MS培养基为基本培养基，培养基按照常规方法，根据表1正交试验设计的不同配方配制， 添加30g/L的蔗糖、6g/L琼脂粉，pH58～60，121℃～124℃(11kg/cm2压力)灭菌15min。在无菌条件下，将草珊瑚无菌再生苗切成1～15cm长带节茎段，接种于培养基中，每瓶3～4个。培养温度(25±2)℃，光照用日光灯1800～2200lx，每天连续光照8h。28d后统计不定芽诱导率及不定芽的增殖率。 毕业论文 　 　2　结果与分析 　　21　不同激素配比对草珊瑚丛芽诱导的影响　从表2结果可知，处理10和处理14均能获得较高的不定芽诱导率，即3mg/L6BA+01mg/LIBA和25mg/L6BA+01mg/LIBA的组合，在此激素组合水平下， 草珊瑚不定芽生长迅速，较粗壮，说明草珊瑚不定芽诱导阶段要求有较高的外源激素水平。但高含量的细胞分裂素(处理13~16)会在不定芽形成后，芽的基部膨大导致材料愈伤化。故不定芽诱导中以处理10组合较为合适。在两种激素的试验处理中，单独使用6BA的量达3mg/L(处理13)时，不定芽诱导率可提高到7368%，不定芽萌动时间提早，接种后15d左右就会看到茎节处长出不定丛