草苁蓉提取物对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经干细胞巢蛋白及学习.docVIP

草苁蓉提取物对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经干细胞巢蛋白及学习 　 作者：周丽莎 朱书秀 王小月 【摘要】 目的探讨草苁蓉提取物对β淀粉样肽（β-AP）所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的脑内巢蛋白（Nestin）表达的影响，并对其保护作用提供理论依据。方法取健康的SD大鼠60只，随机分为正常组、假手术组、模型组和草苁蓉提取物高、中、低剂量组。用Aβ1～40微量注射至大鼠双侧Meynert基底核，建立AD模型，用草苁蓉提取物进行治疗，于治疗后用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力，用免疫组化染色法检测Nestin阳性神经细胞数的表达。结果各治疗组的逃避潜伏期较模型组明显缩短，大鼠在原平台象限游泳时间占整个游泳时间的百分比显著升高，穿过原平台所在位置的次数明显增加（Plt;0.01）。草苁蓉提取物高剂量组大鼠海马区Nestin阳性神经元数量在治疗组中表达最强，与模型组相比，具有显著性差异（Plt;0.01）。结论 草苁蓉提取物能增强AD模型大鼠海马神经干细胞Nestin的表达，提高AD大鼠的学习记忆能力，其机制尚需进一步研究。 【关键词】 草苁蓉 阿尔茨海默病模型 巢蛋白 阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是发生在早老及老年期、不可逆转的、渐进性的、以精神行为异常为主的脑变性疾病。其特征性病理标志为脑内细胞外存在大量由淀粉样β蛋白（beta-awyloid protein,Aβ）组成的老年斑，神经元缠结（NFTs）及皮质、海马选择性神经元变性和缺失。其中海马病变早于皮质，在疾病早期海马区神经元便明显减少［1］。研究认为，神经毒性物质Aβ在脑中广泛沉积，在AD发病中起中心作用，能引发神经元退化和凋亡等诸多病理过程，最后引起痴呆［2］。草苁蓉为列当科寄生草本植物，具有很高的药用价值，近年来文献报道，草苁蓉具有抗炎、抗缺氧、抗疲劳、促进记忆及增强免疫功能等效用。本实验通过双侧Meynert基底核微量注射凝聚态Aβ1～40建立AD模型，观察草苁蓉提取物对AD模型大鼠学习记忆能力的影响及其脑内巢蛋白（Nestin）表达规律。 1 材料 取SD大鼠60只，体重200～250 g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。WDT-Ⅱ微电极推进器脑立体定位仪（国营西北光化学仪器厂）、Morris水电迷宫（中国医学科学院药物研究所）。Aβ1～40，Nestin一抗（美国Biosource公司），DAB、即用型SABC染色试剂盒（武汉博士德），1∶6草苁蓉提取物（江汉大学医学院提供）。Aβ孵育：Aβ1～40加入0.1％三氟乙酸后放入38℃水浴恒温箱孵育48 h，使其成为凝聚状态备用。 2 方法 2.1 分组与处理对照组为正常组及假手术组：正常组，不进行任何处理及治疗，每组10只；假手术组注射等量生理盐水，手术方法见“2.2”项下方法，每组10只。将造模成功的动物随机分为模型组，中药组。模型组，10只，造模成功后，不进行任何治疗。中药组，30只，低剂量组给予每只大鼠中药草苁蓉的提取物1 ml(折合生药0.03 g/ml)灌胃，中剂量组给予每只大鼠中药草苁蓉的提取物2 ml灌胃，高剂量组给予每只大鼠中药草苁蓉的提取物4 ml灌胃，每组10只，连续28 d。 2.2 动物模型的制作大鼠在10%水合氯醛380 mg/kg腹腔注射麻醉后，固定于脑立体定位仪。脑立体定位仪固定平颅头位切开皮肤及皮下组织，用棉签蘸取少量双氧水轻拭颅骨表面，清除泡沫能清晰显现前囟，参照大鼠脑立体定位图谱，以前囟为原点，向后1.4 mm，旁开3.0 mm为穿刺点转穿颅，自脑表面进针7.0 mm分别至双侧Meynert基底核，用微量注射器将聚集状态的Aβ1～40各1 μl（5 μg）在2 min内缓慢注入，留针10 min，以使Aβ1～40充分浸润局部组织，注射完毕后将微量注射器在7 min内缓慢抽出。假手术组注射等量的生理盐水。所有操作均在无菌条件下进行，术后每只大鼠腹腔注射青霉素1万单位，缝合切口，常规饲养。 2.3 学习记忆观察治疗后进行Morris水迷宫训练，首先进行定位航行试验，历时3 d，将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中若干次，记录其寻找到隐藏在水面下平台的时间，即逃避潜伏期。如果大鼠在120 s内未找到平台，需将其引至平台。这时潜伏期为120 s。然后于第4天撤除平台进行空间探索试验，任选1个入水点将大鼠放入水池中，考察大鼠对原平台的记忆，记录其穿过原平台所在位置的次数及在原平台象限的游泳时间和距离。训练期间水温（26±1）℃。数据采集和处理由Morris水迷宫图象自动监视处理系统完成。将各组的成绩进行比较。 2.4 标本采集最后1次Morris水迷宫测试24 h后灌注取海马。大鼠用10%水合氯醛380 mg/kg腹腔注射，麻