血痕的血型测定.PPT

Introduction Features of bloodstain Main type of biological evidence 最常见 Bloodstain Pattern Analysis 血迹形态分析——现场重建 Important evidence collected from the suspect, victim, tools etc.重要物证 Degrade 腐败降解迅速 Objective 目的 ①Is this stain blood? 是否血痕？ ② Is this human or not? 人血还是动物血？ ③If it is human, what’s the blood group or genotype? 血型以及其它遗传标记检测，进行个人识别。 ④Other aspects 其它检验如性别、出血量、部位等 Location 部位 Distribution, position, amount … ﹡Search of hidden bloodstain ﹡Never touch directly Benzidine test 灵敏度高: 50 万倍稀释，仍可能呈阳性结果 不特异:两类干扰物质氧化剂/生物源性物质 必须按次序滴加试剂! phenolphthalein test 酚酞试验 鲁米诺试验 Luminol test 大范围内微量隐蔽血痕发现 黑暗中观察到/借助特殊观测装置 不干扰下游DNA检测 氧化物以及有催化作用金属也能让其发光 血 痕 预 试 验＊ 目的：从大量的可疑血痕中筛除不是血痕的检材 特点：灵敏、简便、快速 方法：多数测定血红蛋白或其衍生物过氧化物酶活性 结果：阳性反应，可能是血；阴性结果否定血痕 意义：阴性结果可以否定血痕 Confirmatory Test 血痕确证试验 目的：确证检材是否为血 特点：特异，不灵敏 方法：检测检材中是否含有血红蛋白或其衍生物。 结果：阳性--确证血痕，阴性--不是血或已被破坏 意义：阳性结果可以肯定是血痕 不灵敏→阴性结果的检材可直接作种属试验 沉淀反应（precipitation reaction） 可溶性抗原+特异抗体→比例适合→复合物沉淀 环状沉淀反应 抗原抗体置于试管内相重叠，在接触面产生沉淀环 琼脂扩散试验 抗原抗体在凝胶中相遇产生沉淀线。 氯金酸(HAuCl4)+还原剂→金颗粒（红色）→带负电的疏水胶溶液，称胶体金。 胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附，可以与免疫球蛋白、糖蛋白、酶等非共价结合。 胶体金+免疫球蛋白→免疫胶体金 吸收试验 absorption test 血痕中血型物质能与相应的抗体发生特异性的结合，使抗血清中的游离抗体减少或消失，该血清再遇相应的红细胞则不再发生凝集反应，或发生弱的凝集反应，从而可推断血痕中所含的抗原，以确定血型。若血痕中无某种ABH 抗原，则不能抑制抗血清中的相应抗体，抗体与相应的指示红细胞会发生凝集反应，其反应的强度没有变化。根据抗血清在与血痕吸收反应前后的效价改变情况，可推断血痕所含的血型抗原种类，判断血痕的ABO血型。 解离试验 elution test 原理： 血痕中的Ａ、Ｂ、Ｈ抗原能与相应的抗-Ａ、抗-Ｂ、抗-Ｈ抗体发生特异性的结合反应，这种特异性结合是可逆的，56℃加热后，血痕上抗原结合的抗体可以解离下来。用已知的 A、B 和 O 指示红细胞检测解离液中抗体。红细胞出现凝集者为解离试验阳性，红细胞不凝集者为解离试验阴性。综合反应结果，可判断血痕的ABO血型 主要试剂 STE缓冲液（10mmol Tris-Cl;10mmolNaCl;1 mmolEDTA） 10％SDS（十二烷基磺酸钠） 10mg/ml PrK（蛋白酶K） 1M DTT (二硫苏糖醇) 10％Chelex-100 (Bio-Rad公司) Tris饱和酚 三氯甲烷 AmpFlSTR Identifiler试剂盒 (AB公司) 将适量血痕置2.0 mL高速离心管，加入适量去离子水浸泡，高速离心后去除血红蛋白液，重复1至2次以充分去除血红蛋白，检材浸液呈微黄或无色。 微量血痕可不经去除血红蛋白预处理。 鲁米诺与氢氧化物反应时生成了一个双负离子（Dianion），它可被过氧化氢分解出的氧气氧化，产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定，立即分解出氮气，生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸。激发态至基态转化中，释放的能量以光子的形式存在，波长位于可见光的蓝光部分。我们常说的鲁米诺试剂是鲁米诺与过氧化氢（双氧水的主要成分）的混合物，主要用于现代刑侦的的血液检测