葎草抗结核分枝杆菌探究.docVIP

葎草抗结核分枝杆菌探究 　 作者：陈伟光 林霞 睢凤英 尹秀 屠婕红 盛静 黄佳 【摘要】 　　目的研究葎草提取物抗结核菌活性及有效部位。方法以体外抑菌实验筛选葎草抗结核活性部位，采用试管倍比稀释法测定葎草提取物最低抑菌浓度（ＭＩＣ），评价其体外抗菌活性。结果葎草的正丁醇萃取部位对结核分枝杆菌标准株Ｈ３７ ＲＶ 及临床分离的敏感菌株具有较明显的抗菌作用，粗提物的ＭＩＣ 为１２５ μｇ· ｍｌ－１ ，高浓度１ ｍｇ· ｍｌ－１ 时有杀灭作用。结论葎草提取物对结核杆菌具有明显的抗菌活性，有进一步研究开发的价值。 【关键词】 葎草 结核分枝杆菌 抗菌活性 　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｓ from Humulus scandens ａｇａｉｎｓｔ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｄ ｔｏ ｆｉｎｄ ｏｕｔ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ．MethodsＴｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ iｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ tｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ bａｃｉｌｌｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Humulus scandens．ＭＩＣ ｏｆ ｔｈｅ extracts ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ double ｄｉｌｕｔｉｏｎ ．ResultsTｈｅ Ｎ －ｂｕｔａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｏ Ｈ ３７ ＲＶ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎ ｗｈｉｃｈ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｌｉｎｉｃ ．ＭＩＣ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ １２５ μｇ· ｍｌ－１ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ （１ ｍｇ· ｍｌ－１）ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｈａｄ ａ ｋｉｌｌｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ConclusionThe ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ H．scandens ｈａve ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｔ ｉｓ worthy ｔｏ ｂｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｆｕｒｔｈｅｒ． 　　Key words：Humulus scandens （Ｌｏｕｒ．） Ｍｅｒｒ．； Ｔｕｂｅｒｃulous ｂａｃｉｌｌｕｓ； Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ 　　近年来，全球结核病疫情再度上升，受到了世界各国的关注。全球１／３ 人口（约２０ 亿）感染过结核菌，全世界现有结核病人２ ０００万，每年还会新发生８００ ～１ ０００ 万肺结核病人，死亡约２００万人。２０００ 年全国结核病流行病学调查的结果显示，我国有４～５ 亿人受到过结核杆菌的感染，有各类肺结核病人约８００ 万，每年新增传染性肺结核患者１５０ 万人，有１３ 万人死于结核病。目前临床上常用的抗结核药物大多对肝、肾脏有较大的毒性，且易产生耐药性。因此，近年来从天然资源中寻找安全有效的抗结核药物，已引起越来越广泛的重视。葎草是一种民间草药，为桑科植物Humulus scandens （Ｌｏｕｒ．） Ｍｅｒｒ．的全草。含青兰苷、天门冬素、挥发油、鞣质及树脂、木犀草素葡萄糖苷、大波斯菊苷、牡荆素等黄酮类成分，具清热解毒、利尿消肿等功效，民间用于肺结核潮热、胃肠炎、痢疾、淋证、痔疮等证［１］ 。早期曾有关于葎草用于治疗结核病的报道［１］ 。为探索抗结核中药，我们对葎草中的成分进行了初步的分离，并进行了葎草提取物对结核分枝杆菌的体外抑菌活性研究。现报道如下。 　　　1 材料与方法 　　1.1 材料葎草采自嘉兴郊区，由嘉兴学院生药、天然药物化学教研室陈伟光副教授鉴定。采回后切成长２ ｃｍ 的小段，在阴凉处用风扇吹干备用。 　　1.2 菌株结核菌标准株Ｈ３７ ＲＶ，由杭州市预防保健门诊部检验科提供（购自北京疾控中心）。临床分离结核菌株由嘉兴市第一医院提供。 　　1.3 药液的制备取葎草段（２ ｃｍ 长）５００ ｇ，７５％乙醇回流提取，提取液回收溶剂至无醇味，加适量蒸馏水溶解，分别依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，上述各萃取部位回收溶剂后得各提取物。将各提取物定量溶于２５０ ｍｌ 容量瓶中，加５０％乙醇至刻度，超声助溶，制成每毫升含相当于２ ｇ 生药的供试药液。剩余的水溶液挥去正丁醇，调节至同样浓度，置冰箱中备用（６℃）。 　　1.4 含药培养基的制备按常规方法配制罗氏培养基，取上述各种葎草提取液１ 份，加入培养基５ 份混匀，即成１∶５ 稀释度的含药培养基，分装中号试管，每管６ ｍｌ。每种药液做３ 个复管，灭菌