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第七章  细菌对抗菌药物敏感性的检验 学习目标: 现状： 在应用抗菌药物治疗过程中,细菌对药物的敏感性会发生改变.近年来,随着抗菌药物的广泛应用,更因为广谱和超广谱抗菌药物的滥用,造成耐药菌株数迅速增加,耐药范围不断扩大,导致抗菌治疗效果严重下降,耐药菌引起的内源性感染和医院交叉感染也日益增多。因此，必须加强细菌对抗菌药物的的实验室检测，从而及时准确地监测细菌对药物的敏感性和耐药性改变。 临床微生物实验室做药敏试验的目的： 一是指导临床医师选择最佳抗菌药物进行治疗； 二是在一定区域内进行耐药性变迁的微生物流行病学调查，以宏观控制耐药性、院内感染的发生发展。 一、概念 根据常规剂量的待测药物在体内所能达到的浓度对细菌的影响，可将被检菌株对待测药物的敏感程度分为敏感、中度敏感/中介度、耐药三级。 敏感（S）:表示被检菌可被常规剂量的待测药物在体内达到的浓度所抑制或杀灭。 耐药(R):表示被检菌不能被常规剂量待测药物所达到的浓度所抑制。 中度敏感(MS):表示被检菌可被待测药物大剂量给药所达到的浓度所抑制或在药物生理性浓集的部位被抑制。 中介度(I):是为防止因技术因素失控导致结果误差而设置的缓冲域 最小抑菌浓度(MIC):抗菌药物能抑制被检菌生长的最低浓度。 对同一菌株而言，药物的MIC值越小，其抗菌力就越强，细菌对这种药物就越敏感。 最低杀菌浓度(MBC):抗菌药物完全杀灭细菌所需要的最低浓度。 二、药敏试验的临床意义 1.筛选药物 2.耐药监控 3.评价新药 4.鉴定细菌 三、药敏试验的常用方法 1、 纸片扩散法 2、稀释法 稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilution test)、微量肉汤稀释法(microdilution test)、琼脂稀释法(agar dilution test)。 3、E-test法 1.扩散法 1)方法：是将含有定量抗菌药物纸片(药敏纸片)贴在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度逐渐递减，使纸片周围的敏感细菌在一定距离内的生长受到抑制，形成抑菌圈，再测量抑菌圈的直径来判定待检菌对被测药物的敏感程度。 2）其优点：是方法简单易行、价格便宜、药物选择性灵活，适用对生长快的细菌进行药敏试验。 3）缺点：是该方法操作时影响因素较多，需注意控制。 2．稀释法  方法：即用肉汤或琼脂培养基作为稀释剂，倍比稀释抗菌药物，定量加入被检菌株。经培养后观察抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。临床工作中常根据抗菌药物在体内的治疗浓度与该药体外最低抑菌浓度(MIC)之间的关系来判断细菌对该药的敏感程度。 优点是可直接定量地检测抗菌药物在体外对病原菌的抑制或杀伤浓度，有利于临床根据MIC、药物代谢等拟定合理的治疗方案，也是目前厌氧菌等的最佳测定方法。 缺点是操作比较烦琐，不便于基层实验室中开展。 细菌药敏试验-宏量稀释法 3.E-test法  方法：是结合了扩散法和稀释法的原理和特点，操作时用宽5mm、长5Omm的塑料试条与抗菌药物浓度梯度试条粘合，贴在涂有细菌的琼脂板上。抗菌药物在琼脂内向四周扩散，可使敏感细菌在一定范围内的生长受到抑制，形成抑菌圈。可根据药敏试纸条两侧抑菌圈与试条相交位置的刻度数值，准确、定量地测出抗菌药物对被检菌的最低抑菌浓度(MIC)。 特点：同时具有扩散法和稀释法的优势，操作简单、定量检测、结果直观准确、重复性好，可获得与稀释法相同的效果，且较稀释法读出不连续值更为准确。可广泛应用于许多微生物的药敏试验。对各种耐药表型如中低度耐药株、延迟表达耐药的菌株均可获得良好的效果。 细菌药敏试验- E-test法 E-test Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip. Combines ease of KB with an MIC method. Particularly useful for S. pneumoniae. 4、联合药敏试验 方法：一般应用两种抗菌药物同时对被检菌进行扩散法或稀释法药敏试验，根据抑制圈的形态变化，可判断两种药物是否具有协同、累加无关或拮抗作用。以检测两种抗菌药物之间的药效相关性。 特点是可预期任何两种抗菌药物联合用药的治疗效果，指导临床选择最佳治疗方案。在提高疗效，减少用药剂量，降低毒性反应，防