NOD%2fSCID鼠荷人视网膜母细胞瘤免疫重建转移模型及转移细胞系建立的实验的分析研究.pdf

◇!，、巴纛蔓N。。，scI。鼠菏人视网膜母妇胞癌免疫重连转移模型覆转移细胞系连主的宾验研充 中文摘要 NOD／SCID鼠荷人视网膜母细胞瘤 免疫重建转移模型及转移细胞系建立的实验研究 专 业：眼科学 硕士研究生：张波 导 师：李永平教授 摘 要 立题背景： 瘤，其发病率有上升的趋势。它不仅危害视功能而且威胁患儿生命。近年来对于 RB的发病机制研究虽有了氏足的进步，但临床治疗中仍有不少的问题和困难亟 待进一步研究。由于RB多发生于2岁以下的婴幼儿，致使其难于早期珍断发现， 以致相当部分患儿就诊时已处于中晚期，使治疗更为棘手。目前，RB的治疗措 施主要包括：手术摘除眼球、放疗、冷冻治疗、光动力疗法和化疗等综合治疗。 一L述各种疗法虽然使RB患儿的预后有了不同程度的改善，但普遍缺乏对肿瘤病 变的特异性及针对性。肿瘤的免疫生物学治疗是肿瘤研究领域的热点，己成为肿 瘤治疗的第四主要模式。但对于免疫治疗效果的评价以及抗肿瘤免疫机制尚有待 更深入的研究。自发性退变是RB的重要特点，其退变率在人类恶性肿瘤中高居 首位。目前认为自发性退变与机体的免疫反应密切相关，但具体机制尚不清楚， 因此在动物体内重建人的免疫系统，并在此基础上观察肿瘤的发生、发展，以便 更好地模拟人类肿瘤的生物学行为，进一步为RB肿瘤的免疫治疗寻找新的突破 口。 肿瘤的侵袭转移是恶性肿瘤的基本特征，也是肿瘤治疗困难及失败的原因所 ◇饿。撼NOD㈣骈人视网膜母细胞舭压重建特书幅型压蝌；细胞系连王的宴验研究 中文摘要 在。肿瘤的转移过程相当复杂，其机制尚不完全明确。目前认为肿瘤的转移涉及 5个步骤：(1)肿瘤的转化(即指母瘤中瘤细胞的表形和基因的表达改变)；(2) 肿瘤的分解(肿瘤的分离和局部的侵袭)；(3)肿瘤内渗于血管、播散：(4)肿 瘤细胞的停滞、黏附、及外渗；(5)肿瘤细胞在远处增殖、生长。同样RB的转 移是临床治疗的难点及造成患儿死亡的重要原因。RB主要通过以下方式转移： (t)肿瘤从眼到脑可沿视神经直接浸润，通过眼眶软组织的侵范再到眶骨或眶 骨各孔进入颅内；(2)视神经内的瘤细胞侵范软脑膜时，通过脑积液循环进入脑 和脊髓：(3)血性播散导致广泛转移。(4)在晚期病例当眼前段及前部眼组织大 范围侵犯时通过淋巴扩散。迄今为止，对RB转移的研究仅仅局限于对部分病例 及其病理结果的分析，还未能揭示RB转移的机制。非肥胖型糖尿病／严重联合免 疫缺陷鼠(NOD／SC[D鼠)是严重联合免疫缺陷鼠与NOD．Lt鼠回交所得，其T、 B淋巴细胞及先天免疫功能缺乏。由于NOD／SCID鼠较易进行异种移植及人免 疫系统重建，目前已被广泛运用于肿瘤的研究。因此，我们推测，如将NOD／SCID 鼠应用于RB转移的研究，有可能进一步揭示RB转移的机制，并为临床治疗提 供新思路。 研究目的： 1．建立人免疫重建NOD／SCID小鼠荷人视网膜母细胞瘤的动物模型，观察 其生物学特性。 2．通过建立人视网膜母细胞瘤的NOD／SCID鼠皮下异位移植瘤模型，并探讨 转移的发生、分布规律。 3通过NOD／SCID鼠筛选具有更高侵袭转移的视网膜母细胞瘤细胞系，为 深入研究RB的转移及生物学行为提供更好的实验材料。 实验方法： 1．将6～8周龄NOD／SCD雌性小鼠随机分为4组：空白组、人化组、单纯 荷瘤组及人化荷瘤组，每组各5只。分离健康成年人外周血单个核细胞，分别腹 腔注射到人化组、人化荷瘤组。24h后单纯荷瘤组、人化荷瘤组双侧腹股沟处皮 ◇妻．．生，=!!：：。～N。。／sc【。鼠荷人视网腱母细胞瘤免症重建转移模型覆转穆细胞系建且的害验研完 中文摘要 下接种人视网膜母细胞瘤SO．Rb50瘤细胞。定期观察小鼠健康状况及移植瘤生 长、转移情况。通过形态学、免疫组织化学染色、ELISA法、流式细胞仪等方法 检测小鼠人免疫功能重建的情况及移植瘤的生物学特性。 2．NOD／SC[D／b鼠左侧腹股沟皮下接种人视网膜母细胞瘤SO．Rb50瘤细胞， 观察荷瘤小鼠生活行为及移植瘤的形成、生长，定期处死小鼠观察肿瘤转移的发 生及分布。通过形态学，免疫组织化学染色方法，对皮下原发肿瘤