壳聚糖酶分离纯化、性质及降解产物壳寡糖制备及分析.pdf

壳聚糖酶分离纯化、性质及降解产物壳寡糖制各与分析 壳聚糖酶分离纯化、性质及 降解产物壳寡糖制备与分析 摘要 壳聚糖酶是一种专一性降解壳聚糖的水解酶，可用于制备功能性的壳寡糖， 又可作为生物控制剂，提高植物的抗病能力。 条件下进行发酵罐放大发酵培养，72小时后酶活达24U／mL。发酵租酶液经离心， Fast S-100 20％～70％硫酸铵分级盐析，Q-SepharoseFlow阴离子交换、Sephacryl 凝胶过滤后，得到电泳纯的壳聚糖酶，纯化后酶的比活力为1336U／mg，纯化了 28．9倍。酶的性质研究表明，其分子量为66．2kD，酶解最适温度为55℃，最适 活有促进作用，Cu“，Fe”，}1矿对酶活有抑制作用，小分子物质EDTA与SDS对酶 活有抑制作用，而IAA和B一巯基乙醇对酶活稍有促进作用。该壳聚糖酶为专一 性酶，动力学参数肠值为5．15mg／mL。此酶的活性明显高于已报道的其他壳聚 糖酶，通过此酶大规模生产壳寡糖在工业生产上极有应用价值。 对酶降解法制备壳寡糖的生产工艺进行研究，分别考察了温度、pH、底物 浓度、脱乙酰度、酶用量、反应时间对酶促反应的影响。酶解产物进行HPLC分 析，通过Bio—GelP。柱对酶解产物进行初步分离，并对分离产物TLC分析。结果 表明，此酶是一种内切酶，以内切方式水解壳聚糖B一(1，4)糖苷键，降解的最佳 酶降解产物数均分子量将降低，9．08U酶液至少能降解19壳聚糖底物 20、10以下的壳寡糖。在以上最佳条件下酶解得到一批壳寡糖，对其部分质量 标准进行评价，具体如下：外观，淡黄色粉末；pH7．35；水溶性，99．9％；水分， 12．1％；灰分，1．65％；重金属铅含量2．06ppm；平均分子质量：2400。 对YJ02菌株的发酵液的生物学功能进行初步研究，发现发酵液对3种植物 致病菌均有抑制作用。酶解得到不同分子量组分的壳寡糖的作用于体外Hela细 胞，经MIT检验，显示与正常对照组无显著差异，表明其在体外无抑制Hela细 壳蒙糖酶分离纯化、性质及降解产物壳寡糖制各与分析 胞生长的作用。 关键词：壳聚糖酶；纯化；酶解；壳寡糖；活性 andcharacterizationofchitosanasewhichwasused Purification to and ofit chitooligosaccharidesanalysis prepare Abstract Chitosanaseswhich the ofehitosancanbe catalyzehydrolytic degradation usedfor offunctional alsoCanbeusedas preparation chitooligosaceharides．They controlin to anti-diseaseabilities． biologicalagentagricultureimproveplant with Abacterium chitosan high is inOUr degradingactivitypreservedlaboratory． at chitosanaseisincubated