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第十章 吸光光度分析法 第一节 吸光光度分析概述 第二节 吸光光度分析基本原理 第三节 显色反应及其条件的选择 第四节 光度测量的误差及测量条件的选择 第五节 吸光光度分析方法及仪器 第六节 吸光光度分析法的应用 作业：10、12、13 第一节 吸光光度分析概述 化学分析 、仪器分析 化学分析 重量分析法，滴定分析法 仪器分析 以物质的物理性质或物理化学性质为基础的分析方法， 这类方法通常是以测量光、电、热、声等物理量求得分析结果的，因而需要特殊的仪器。 物质的颜色与浓度的关系 通过比较溶液颜色的深浅来确定物质含量的方法称为比色分析法 目视比色法；光电比色法；分光光度法 根据有色物质溶液对光的吸收程度来确定该物质的含量，这种方法称为可见光分光光度法 在光谱分析中，基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法。 特点： 第一，灵敏度高。 物质的量浓度下限一般可达10-5～10-6mol?L-1，是测定微量组分（1%～0.001%）的常用方法，甚至可测定低至0.0001%～0.00001%的痕量组分。 第二，准确度高。 一般比色分析法的相对误差为5%～10%，分光光度法为2%～5%。 第三，操作简便，测定快速 一般只经过显色和测定两步就可得到分析结果。 特别是近年来，一些灵敏度高、选择性好的显色剂和掩蔽剂的应用，使测定不经分离就可进行，大大提高了测定速度。 此外吸光光度分析所用仪器设备也不复杂，操作方便，容易掌握。 第四，应用广泛 几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用比色分析法和分光光度法进行测定，所以吸光光度分析法广泛应用于工农业生产和生物、化学、医学、临床、环保等领域。 第二节 吸光光度分析基本原理 一、物质的颜色和对光的选择性吸收 （一）光的基本性质 光是一种电磁辐射或叫电磁波 光具有波粒二象性，即波动性和粒子性 波动性的表现： 干涉、辐射、折射和偏振等现象， 波长λ(cm)、频率ν(HZ)和光速c(cm?s-1,在真空中约为3×1010cm·s-1)，来定量描述, 其关系式为 ： λν=c 光的粒子性 光电效应 在电磁波谱中，波长范围在400-760nm的电磁波能被人的视觉所感觉到，所以这一波长范围的光称为可见光。 人眼感觉到的可见光都有什么颜色？ 这些光的波长或能量是否相同？ 表10-2不同波长光的颜色 日光、白炽灯光等是单色光还是复合光？ 它是由各种不同颜色的光按一定的强度比例混合而成的。 白光经过色散作用可分解为红、橙、黄、绿、青、蓝、紫七种颜色的光。这七种颜色的光叫做单色光， 每种单色光都具有一定的波长范围。 是不是只有红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等颜色的光混合在一起才能形成白光？ 两种适当颜色的单色光按照一定的强度比例混合也可成为白光。 这两种单色光称为互补色光。 （三）光吸收曲线 将不同波长的光依次通过某一有色溶液,测量每一波长下有色溶液对该波长的吸收程度（吸光度A），然后以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标，所得曲线称为光吸收曲线或吸收光谱曲线。 图10-2是四种不同浓度的KMnO4溶液的光吸收曲线。 结论： （1）最大吸收波长 吸光度最高点所对应的波长称为最大吸收波长， 用λmax表示。 KMnO4溶液的λmax=525nm。 （2）具有特征性，浓度改变，形状不变 （3）吸光度A随浓度的增加而增加。 二、光吸收定律 溶液对光的吸收程度与该溶液的浓度、液层的厚度及入射光的强度等有关。 如果保持入射光的强度不变，则光吸收程度与溶液的浓度和液层的厚度有关。 朗伯和比尔分别于1760年和1852年研究了光的吸收程度与有色溶液液层厚度及溶液浓度的定量关系，其结论为： 一束单色光通过某一有色溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液液层厚度及溶液浓度成正比。这一结论称为光吸收定律，或称为朗伯--比尔定律。 (一)朗伯—比尔定律的数学表达式 一束强度为I0的平行单色图光通过液层厚度为b的有色溶液， 吸光质点对光的吸收使透过溶液后的光强度减弱为I, 设想把液层分为厚度为db的无限小的相等的薄层，薄层中吸光质点数为dn，照射在薄层上的光强度为Ib,光透过该薄层后，其强度减弱为dI 则dI与dn和Ib成正比，即 -dI=k1Ibdn　　　　　　　（10－3） 或 设有色金属离子溶液浓度为c，薄层中吸光质点数dn与c和db成正比，即 dn=k/c db k/为比例常数，将10-4式代入式10-3中，合并常数项，得 如果有色溶液对光无吸收，即I=I0， 式10-7是朗伯—比尔定律的数学表达式。它表明： 当一束单色光通过有色溶液后，溶液的吸光度与有色溶液的浓度及液层厚度成正比。 吸光度A与透光度T的关系为 如果浓度c的单位为mol·