江苏省栟茶中学高三生物考前赢分30天-第23天.docVIP

2013年江苏栟茶中学高三生物考前赢分30天 第23天 1 基因工程的诞生 基础理论：DNA是遗传物质；DNA双螺旋结构和中心法则的确立；遗传密码的破译 技术支持：基因转移载体的发现；工具酶的发明；DNA体外重组的实现；重组DNA表达实验的成功 2 基因工程的原理及技术 （1）基因重组的基本工具： 限制性核酸内切酶（限制酶）：主要从原核生物中分离纯化出来，这种酶在原核生物中的作用是防止外来病原物的侵害，将外源DNA切割保证自身安全 它能识别DNA分子的某种特定核苷酸序列，并切割两个核苷酸之间的磷酸二酯键，产生的末端有黏性末端（如EcoRⅠ切割的末端）和平末端 DNA连接酶：EcoliDNA连接酶连接黏性末端的DNA片断；T4DNA连接酶黏性末端和平末端都可以连接；而DNA聚合酶是将单个的脱氧核苷酸加到DNA片断上。 载体：种类有质粒（常用，并被人工改造）、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒； 条件：能自我复制；有一个或多个酶切位点；有标记基因位点；对受体细胞无害 （2）基因工程的基本操作程序： ①目的基因的获取：概括地说，主要有两条途径：一条是从自然界已有物种中直接分离基因；另一条是人工合成基因。 直接分离基因最常用的方法是建立基因文库。在获取真核细胞中的目的基因时，一般是用建立cDNA文库方法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因。 利用PCR技术扩增目的基因：引物（DNA或RNA小片段）、模板、高温DNA解链、引 物结合到互补DNA链、热稳定的DNA聚合酶、dCTP、dATP、dGTP、dTTP DNA合成仪用化学方法人工合成基因 ②基因表达载体的构建：（基因工程的核心），目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，使目的基因能够表达和发挥。重组DNA分子的特点：具有目的基因、启动子、终止子、以及标记基因。 ③将目的基因导入受体细胞： 导入植物细胞：农杆菌转化法P12图（双子叶植物和裸子植物）、基因枪法（单子叶植物）、花粉管通道法（转基因抗虫棉用）； 导入动物细胞：显微注射技术（注射入受精卵中）； 受体细胞是细菌：如果运载体是质粒，一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使感受态细胞吸收重组质粒。（在全部受体细胞中，真正能够摄入重组DNA 分子的受体细胞是很少的。） ④目的基因的检测和表达： 检测受体细胞中是否导入了目的基因的方法有很多种：1 DNA上检测是否有目的基因（利用DNA分子杂交技术）；2 目的基因是否转录出mRNA（基因探针与mRNA杂交）；3 目的基因是否翻译出蛋白质（利用抗原-抗体杂交）；4 性状水平的检测。例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。 重组的DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。例如，让棉铃虫食用棉的叶片，棉铃虫被杀死，这说明抗虫基因已植物中表达。 3 基因工程的应用 （1）植物基因工程成果： 抗虫转基因植物（Bt毒蛋白基因如抗虫棉、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、 植物凝集素基因等） 抗病转基因植物（抗病毒：病毒外壳蛋白基因、病毒复制酶基因；抗真菌：几丁质酶基因、抗毒素合成基因） 抗逆转基因植物（鱼的抗冻基因培育耐寒作物、调节渗透压基因、抗除草剂基因） 转基因改良植物（营养价值、实用价值、观赏价值） （2）动物基因工程成果： 提高动物生长速度（外源生长激素基因） 改善畜产品的品质 转基因动物生产药物（牛、山羊等动物乳腺生物反应器中表达了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素、α-抗胰蛋白酶） 转基因动物作器官移植的供体（导入调节因子，抑制抗原决定基因表达或除去抗原决定基因培育没有免疫排斥反应的转基因克隆器官） （3）基因工程药物（利用转基因工程菌生产细胞因子、抗体、疫苗等） 注：如果工程菌为原核生物，因其没有内质网、高尔基体，所以不能生产糖蛋白类物质 （4）基因治疗（导入一分正常基因。从根本上治疗遗传病，不能治疗传染病） 4 蛋白质工程 （1）蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质 （2）蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构，又称为第二代的基因工程。 基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）P27流程图 设计中的困难：如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列 补差纠错 下图为用于基因工程的一个质粒示意图。用EcoRI