SiO-%2c2-微球及离子螯合微球的制备及应用于固定木瓜蛋白酶的分析研究.pdfVIP

摘要 固定化酶可以提高酶的稳定性并增加酶的使用次数，以及易于与 产物和底物分离等优点而被广泛深入的研究。但目前常用的固定化方 法在制备固定化酶时酶活损失较大，且载体常常不可重复使用或载体 的再生操作复杂，限制了固定化酶的产业化应用。本文针对目前固定 化酶方法的不足之处提出了相应对策并对新的酶固定化方法和载体 进行了探索。 本文选用木瓜蛋白酶作为固定化对象，木瓜蛋白酶是一种来源广 泛的巯醇类榱物蛋白酶，在食品、轻纺、医学等领域有着广泛的应用， 木瓜蛋白酶在酶动力学和结构学上都已得到了深入的研究，因此很适 合作为评测酶固定化方法效率的模式酶。 采用正硅酸乙酯与N-(B一氨乙基)一氨丙基三乙氧基硅烷在油包 水形成的微胶囊中同步水解的方法，一步法制各了氨基化的二氧化硅 颗粒，这种颗粒大小均匀，氨基含量和颗粒大小可控，氨基含量高达 5．6衄ol／g。此颗粒经戊二醛处理后，采用共价法固定木瓜蛋白酶， 固定化最适pH6，5，最佳给酶量为15mg／g载体，固定化酶的最适反应 温度为70℃，最适反应pH为6．5，固定化酶热稳定性，pH耐受性， 贮存稳定性都明显高于游离酶，表明此颗粒可作为一种优良的酶固定 化载体。 本文采用了反相悬浮包埋合成磁性琼脂糖微球，采用悬浮聚合法 合成苯乙烯一甲基丙烯酸羟乙酯，经环氧氯丙烷和亚氨基二乙酸处理 使微球带上螯合基团，经吸附铜离子或镶离子后用于固定化术瓜蛋白 酶。实验的初步结果显示，磁性琼脂糖微球而用于固定化木瓜蛋白酶， 并且经洗脱液洗脱，酶可以从载体上洗脱下来，载体经再吸附金属离 子后可以再生，并可用于再次固定化木瓜蛋含酶，载体重复使用3次 后酶活仍达首次时的90％。初步实验结果表离子螯合裁体可用于固定 化木瓜蛋白酶，并作为可再生载体经多次使用。 关键词：siO：， 离子螯合载体， 酶固定， 木瓜蛋白酶 A8STRACT TheiInmobilizedh8vemore timesand en巧—nes s诅biH吼mo托use e喇er i11bu墩 s印暇枷∞细邬Ib蛐旧le粕dp|讪ct t11觚ellj可mes sol戚on．But cum呲洳瞄obilizationhave me吐lods disadValltages， m锄y such勰mllch a舭r coSt．So iII】啪obiliz砒ion∞d王ligll er目帆e扯tiV畸lose afew have iIl only be∞u∞d i姗mobil砌e北yn塘s indus仃ywidely immobili洲onhavebeensmdiedfor abom thoUghem亨me mir哆years． In nlese ord盯t0resolve carriers吼d disadvantag骼，new