蛋白纯化-预装柱篇.PDFVIP

蛋白纯化-预装柱篇 预装柱是指在工厂里已经预装好层析填料的柱子,预装柱的优点点是装填均一,柱效稳定而且对于蛋白纯化 人员来说来说,预装柱具有摸索条件快,结果稳定等优点,可以大大节省人力物力. 1. 预装柱选择指南 2.预装柱接头选择指南 1.Hitrap 系列预装柱接头选择 2.Hiscreen 系列预装柱接头选择 、 3.Hiprep 系列预装柱接头选择 4.Tricon(GL)和 Resource 高分辨率预装柱选择 、 6.原 Hiload 预装柱预装柱选择 新 Hiload 预装柱选择 3.预装柱常见问题解答 柱子出现问题 原因 解决办法 怎么预防 柱子反压逐渐增高 样品中的物质吸附到柱子 进行彻底的清洗 定期清洗,清洗方法见层析介质的 寿命和清洗方法 上 样 时 ,柱 子 压 力 1. 样品在缓冲液中不稳 1.采用高盐,去污 1.所用样品均要 0.22um 膜过滤后 突然增大 定,沉淀 剂或碱清洗 上样以除去颗粒 2. 样品浓度太高聚集 2.更换柱顶的滤膜 2.尽量把样品溶解到平衡缓冲液中 3. 样品中的颗粒堵塞柱 3.稀释样品浓度防止聚集 子 平 衡 柱 子 时 ,压 力 平衡液与储存液互补相容 用 去 离 子 水 去 除 1. 平衡前用水冲洗柱子以及系统 增大 导致盐沉淀 储存液再平衡 2. 柱子储存前用水清洗柱子 3. 所 有 的 溶 液 上 样 前 至 少 用 0.45um 的膜来进行过滤 柱子中出现气泡 泵或管路中有气泡流入 先抽泵气泡 ,后连 1. 实验之前溶液均除气过滤 1．如果是短时间内进气 接 一 个 FR902,低 2. 实验之前把泵气泡抽除 泡 ,可以有解决办法的 流速以赶走气泡 , 3. 尽可能避免气泡进入层析柱 方法来解决 后 面 进 行 柱 效 测 2．如果长时间内处于干 试 ,以观察柱子是 燥状态 ,介质可能受损 否收到破坏 ,如果 坏,重新装柱 ,测柱效等 柱效降低 ,重新装 测试 柱,如果不合格,弃 之 、 压力到达一定程度 层析柱处于长时间超压状 找出堵塞原因 (颗 1. 设定压力报警 时 ,层 析 柱 上 端 出 态 粒堵塞,样品堵塞), 2. 找出超压的原因以便进行预防 现空隙 按 上 述 超 压 情 冴 进行解决 、