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逆流色谱法 逆流色谱（countercurrent chromatography,CCC）是一种全液态型分配色谱，分离柱为空的聚四氟乙烯管或玻璃管，互不相溶的两相溶剂中的一相在重力或离心力的作用下保留在柱内作为固定相，另一相作为流动相从其中穿过，样品中各组分依据其在两相溶剂中的分配系数差异而得到分离。 概述 优点: (1)无不可逆吸附，回收率高； （2）样品不会遭到破坏； （3）溶剂消耗少，比较经济等。目前已用于 多种领域的样品分析或制备。 逆流色谱原理 逆流色谱是将两相溶剂连续地进行高效率混合和分离，从而提高分配效率，缩短分离时间。它利用了流体力学的两种基本体系来实现固定相对物质的保留：第一种为固定螺旋管的流体静力学平衡体系（hydrostatic equilibrium system, HSES）；第二种为转动螺旋管的流体动力学平衡体系（hydrodynamic equilibrium system, HDES）。近年来发现的单向性流体动力学平衡体系为逆流色谱技术开拓了一个广阔的应用领域。 流体静力学体系 a.下相为固定相 b.上相为固定相 流体静力学平衡体系的基本模型由水平缠绕的固定螺旋管组成。把已平衡的两相溶剂中的下相先注满螺管，然后把上相从螺旋管的一端慢慢注入，那么，上相会推动在第一个螺旋单元里的下相下降，至两相之界面到达螺旋单元的底部；这时，上相就会在浮力的作用下，穿过下相而向上升起，使得每一个单元里保留近一半体积的下相。这一过程在每个螺旋单元里重复进行，使得整个管里形成两相交替分布的状态，即建立了流体静力学平衡。这时如果继续注入上相，那么新注入的上相只会取代原来在各螺旋单元里的上相，而下相仍保留在螺旋单元里。反过来，如以下相作流动相，也可建立上述平衡。 流体静力学体系 建立平衡后，螺旋管每个分配单元中都保留了较大量的固定相，流动相和固定相不断混合、分层。如果从螺旋管入口把样品注入，它就会在每个分配单元中的流动相和固定相之间进行分配，最终按照分配系数的大小从出口端依次流出．假如在每个单元里的分配都能够达到平衡，那么，这个体系的螺旋单元数就是理论塔板数。按照流体静力学体系设计的逆流色谱仪有：液滴逆流色谱仪（DCCC）、离心液滴逆流色谱仪（CDCCC）、旋转腔室逆流色谱仪（RLCCC）、回旋腔室逆流色谱仪（GLCCC）和整体集成流通回路（MIFC）。 流体静力学体系 流体动力学平衡体系 流体动力学平衡体系（HDES）的基本模型由水平缠绕的可以绕自身轴线转动的螺旋管组成。与HSES模型相比，明显的差别是螺旋管有一个自转运动，这一简单转动给HDES体系带来了新的特征，涉及到螺旋管内两相溶剂的复杂的流体动力学相互作用。 物体在旋转螺旋管里的运动状态示意图 1．首端；2．玻璃珠；3．铅粒；4．气泡；5尾端． 转动螺旋管中两相的状态 在这种基本模型的实验中，首先在螺旋管里注满任一相作为固定相，另一相作为移动相从螺旋管的首端泵入。当移动相达到第一个螺旋单元时，两相相互作用，进而建立流体动力学平衡，这时，同管壁亲和性弱的一相被分裂为许多小液滴，它们随管子的转动作同步的转动。当连续泵入移动相时，螺旋管其它单元的平衡不断被破坏，而两相又能通过重新调整，在每一螺旋单元里的相对体积很快建立平衡，直到整个管子都建立稳定的流体动力学平衡状。此后，再泵入移动相就只会取代各个螺旋单元里的移动相，而较大量的固定相仍保留在管柱中。 液滴逆流色谱仪 DCCC仪器的工作原理示意 a. 上行方式；b. 下行方式 1．储液器；2泵；3．样品室；4分离管柱；5．收集器 离心式DCCC的工作原理示意图 高速逆流色谱 高速逆流色谱(HSCCC)是一种液-液色谱分离技术，它的固定相和流动相都是液体，没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离等优点。由于HSCCC与传统的分离纯化方法相比具有明显的优点，因此己被广泛应用于中药成分分离、保健食品、天然产物化学、有机合成、环境分析等领域。 HSCCC分离流程图 应用 天然产物已知有效成分的分离纯化 化学合成物质的分离纯化 中药一类、五类新药的开发 中药指纹图谱和质量控制研究 抗生素的分离纯化 天然产物未知有效成分的分离纯化 海洋生物活性成分的分离纯化 放射性同位素分离 多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等 分离实例 南沙参 Nan Sha Sheng 为桔梗科沙参属植物轮叶沙参(Adenophora tetraphylla (Thunb.) Fisch)、沙参(A. stricta Miq.)的干燥根，分布较广，山东、江苏主产。 1 化学成分 甾醇类化合物 脂肪族化合物 2 药理作用 祛痰