动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备2.难点：动物细胞培养.pptVIP

教学目标 1. 能简述动物细胞培养的过程，能解释原代培养、传代培养、细胞株、细胞系等概念。 2. 能列举动物细胞培养技术的应用 3. 能描述动物细胞融合的方法过程 4. 能复述并写出单克隆抗体的制备过程，并能列举单克隆抗体的应用 教学重点、难点 1.重点：动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备 2.难点：动物细胞培养、单克隆抗体的制备 分析：学生第一次接触动物细胞培养的内容，有许多新的名词，同时教师多数也没有做过类似的实验，没见过实物，没有亲身体验，讲起来也很容易照本宣科。单克隆抗体的制备是对动物细胞培养技术、细胞融合技术的具体运用，过程相对复杂，也属于难点。 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。 实验材料：小白鼠 实验器材：培养皿、针筒等等。 实验过程：如下页 克隆的意义与应用 据《新科学家》杂志8月3日报道，韩国著名的克隆专家Woo Suk Hwang一手培育出世界首只克隆犬——阿富汗猎犬，自克隆羊多利诞生之后，公众有兴又见到一条由克隆技术培育存活下来的猎犬。 Hwang的研究小组共采集了1095个母阿富汗猎犬的卵细胞，并将其放入一条公阿富汗猎犬体细胞核进行核移植，然后把他们放置在123个受孕母猎犬的体内。在这么多受孕母猎犬中，只有三个最终成功受孕。其中有一个流产，最后只有两个成功到分娩期。其中一个分娩成功的小猎犬在出生22天的时候死于肺炎。 6.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 3.如何筛选出杂交瘤细胞？ （1）淋巴细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能够被氨基嘌呤阻断。一般不分裂增殖。 （2）骨髓瘤细胞是特殊选择的代谢缺陷型细胞，其DNA合成过程只具有D途径，能被氨基嘌呤阻断。 （3）杂交瘤细胞则即可无限增殖，又具备两条DNA合成途径。 加入了氨基嘌呤的选择培养基 第一次筛选 第二次筛选 HAT培养液 细胞合成DNA有两条途径： 一为主要途径，利用糖和氨基酸合成核苷酸，可被氨基碟呤可阻断； 二为补救途径，通过磷酸核糖转化酶（HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶（TK）利用次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷合成核苷酸。 骨髓瘤细胞缺乏HGPRT和TK（无补救途径）； B细胞具有HGPRT（有补救途径），但在体外不能长期培养，自然死亡； 杂交瘤细胞从B细胞获得HGPRT或TK基因在HAT培养基上生长繁殖。 （五）单克隆抗体的应用 1、用于临床诊断（利用抗体与抗原的特异性结合） 2、形成“生物导弹”治疗肿瘤 目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。 单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤部位，杀死癌细胞，这种抗体——药物结合物称之为生物导弹。它能定向杀灭癌细胞，避免或减少对正常细胞的伤害，大大减轻了抗癌药物的副作用。 四、其它生物工程技术 （一）胚胎移植技术（试管婴儿） 实践意义： (1)提高良种母畜的繁殖力；(2)使母畜一次生胎；(3)进行胚胎性别选择；(4)减少精液消耗；(5)冻存良种胚胎；(6)试管婴儿：可以解除人的某些不孕症。 体外受精 卵细胞 精子 受精卵 胚胎 体外发育 新个体 母体子宫内孕育、产出 受精卵 卵裂 早期胚胎 （二）胚胎分割移植技术 代孕母牛 植入 植入 分割 1、过程 早期胚胎 胚胎 移植 母体子宫 发育 多个幼体 2、特点 属于无性生殖，后代具备一个亲本的遗传物质 3、应用 加快优良种畜的繁殖速度等 切割 多个细胞 早期胚胎 利用胚胎干细胞具有全能性的特点 胚胎移植技术 细胞核移植 细胞拆合技术 卵细胞 C母绵羊子宫 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 早期胚胎 多莉羊 分娩 卵裂 重组细胞 妊娠 电脉冲刺激，动物细胞培养技术 2、克隆羊多莉有几个母亲？ 3、多莉羊是雄还是雌？主要性状像谁？ 4、其性状遗传是否符合孟德尔遗传规律？ （三）核移植技术------克隆 1.核移植技术涉及到几种生物技术？ 例（2004年上海卷）下列关于细胞工程的叙述中，错误的是 A．植物细胞融合必须先制备原生质体 B．试管婴儿技术包括人工受精和胚胎移植两方面 C．经细胞核移植培育出的新个体只具有一个亲本的遗传性状 D．用于培养的植物器官或组织属于外植体 失分陷阱 没有认识到生物的遗传中核遗传和质遗传共同作用的结果，同时对各种细胞工程的