西红花质量评价探究.doc

西红花质量评价探究 　 作者：朱友双，牛万刚，姚宝君 【摘要】 应用高效液相色谱和DAD检测器对上海、浙江、江苏大产地的药材进行了全面质量考察。本文可提供清晰的HPLC指纹图谱，药材总苷含量在23%～27%之间为优，指纹图谱相似度gt;0.9。西红花总苷的指纹图谱特征性及专属性强，可结合含量测定用于全面控制药材质量，确保每批产品的均一性。本文建立了西红花的指纹图谱检测标准，实验方法简便、准确、重复性好。 【关键词】 西红花；含量测定；指纹图谱 西红花为鸢尾科植物番红花（Crocus sativus L.）的干燥柱头，又名藏红花，被誉为“植物黄金”。具有活血化瘀，散郁开结，治忧思郁结，胸膈痞闷，吐血，伤寒发狂，惊怖恍惚，妇女经闭，产后瘀血腹痛［1］。本品在历史上依靠进口，见到的样品有外表加油、掺假、含量低现象存在。现在我国已引种栽培成功，质量优于进口品，每年并有相当数量的西红花药材出口［2］。目前国内已成功开发了西红花总苷片等药物，扩大了内需，因此迫切需要建立一套方便、可行、快速的质量鉴别方法，以便满足工业化生产的需要。 本实验对我国三大产地西红花药材应用现代色谱法—薄层色谱、高效液相色谱和紫外-可见分光光度法进行方法学研究。HPLC指纹图谱首次采用中药质量指纹图谱全谱图相似性计算方法，以指纹图谱和指标成分相结合的方法建立了西红花质量控制标准。 本文领会了国家药品监督管理局于2002年4月在上海召开的全国中药注射剂指纹图谱工作会议上的精神。通过建立中药材指纹图谱，可以促进同品种中成药各生产企业工艺的统一、规范和优化，稳定产品质量，提高质量标准的可控性，通过现代科学手段让世界了解中药，让中药走向世界。 1 仪器、试剂与试药 1.1 仪器 UV762双光束紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。LC-10Atvp岛津高效液相色谱仪（日本岛津公司）。 1.2 试剂 甲醇（色谱纯，杭州汇普化工仪器有限公司）；磷酸二氢铵（分析纯，四川林辰实业集团有限公司）；三蒸水。 1.3 对照品 西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、西红花苷-Ⅲ、西红花苷-Ⅳ。 1.4 药材来源 见表1。表1 西红花药材来源 1.5 药材重量 见表2。表2 药材重量 2 西红花药材质量分析 2.1 紫外-可见分光光度法测定西红花药材总苷含量 2.1.1 样品液、标准液及供试液的制备 2.1.1.1 样品液 分别称取十个批号的药材一定量研成细粉，取60mg精密称定，70℃加甲醇索氏提取至溶液无色，冷却，甲醇定容至100ml容量瓶。 2.1.1.2 标准液 取西红花苷-Ⅰ对照品用甲醇制成0.02mg/ml标准液。 2.1.1.3 供试液 分别精密吸取上述样品液各1ml，甲醇稀释，定容至20ml。 2.2 测定波长的选择 西红花紫外-可见测吸收曲线，分在λmax（432±2）nm及（458±2）nm处有最大吸收。 2.3 西红花药材总苷含量测定 取十个批号药材供试液。以西红花苷-Ⅰ为基准物，433nm处测定吸收度。见表3。表3 西红花药材总苷含量 2.4 HPLC指纹图谱 2.4.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS2 250×4.6mm,5μm;流动相：甲醇-水（53：47）；甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）；流速1ml/min;柱温30℃；检测波长440nm。 2.4.2 样品液及标准液制备 2.4.2.1 样品液 分别称取十个批号的药材研成细粉，精密称取60mg，甲醇索氏提取至无色，甲醇定容至100ml。 2.4.2.2 标准液 取西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和西红花苷-Ⅲ、西红花苷-Ⅳ混合物对照品用甲醇制成0.03mg/ml标准液。 2.4.3 指纹图谱技术对西红花药材质量评价 　 2.4.3.1 流动相的考察与优化 分别用甲醇-水（50：50）、甲醇-水（53：47）、甲醇-水（55：45）、甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（50：50）、甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）、甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（45：55）六种体系进行洗脱，结果以甲醇-水（53：47）和甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）体系得到的色谱峰形较好，尤其以甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）峰形最好，分离度高，大部分得到基线分离，且较稳定。 2.4.3.2 参照峰的选择 西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ为指纹图谱中峰面积积分值较大、出峰时间较早、很稳定的两个峰，而且均可制备纯度gt;98%的对照品，西红花苷-Ⅲ和西红花苷-Ⅳ为指纹图谱中峰面积积分值较小、出峰时间较晚、两个峰较稳定。 2.4.3.3 指纹图谱的测定 精密吸取药材提取液2ml，甲醇定容量至10ml，精密吸取20μl，