解偶联蛋白2启动子区-866G-A多态性及中国北方人2型糖尿病关系.docVIP

解偶联蛋白2启动子区-866G/A多态性及中国北方人2型糖尿病关系 　 作者：李建宁，何岚，叶枫，董春萍，王毅 【摘要】 目的： 研究解偶联蛋白2（UCP2）基因启动子区-866G/A的多态性在中国北方汉族正常人群及糖尿病人群的分布，了解其与2型糖尿病（T2DM）及β细胞功能关系. 方法： 采用PCR及PCRRFLP 方法检测101名正常人及192名T2DM患者的UCP2基因启动子区-866G/A的多态性，对T2DM患者进行葡萄糖耐量试验，计算β细胞功能指数及胰岛素敏感指数. 结果： ① -866G/A基因型频率在中国北方汉族正常人群及T2DM人群中的分布分别为：GG31例(30.7%),GA46例(45.5%),AA24例(23.8%)及GG44例(28.1%),GA103例(49.6%),AA45例(22.3%)，统计分析无显著性差异. ② -866G/A多态性的含A等位基因型与胰腺β细胞的胰岛素分泌功能指数ΔI30/ΔG30，HOMAβ，MBCI及INS30呈负相关. 与胰岛素敏感指数IAI无关. 结论： ① 中国北方汉族人群的UCP2基因启动子区-866G/A基因型分布与日本人相似，与欧洲白人及高加索人群存在显著性差异. ② UCP2基因启动子区-866G/A基因型在两组人群的分布无差异. ③ UCP2基因启动子区-866G/A多态性与胰腺β细胞的胰岛素分泌功能相密切相关. 【关键词】 解偶联蛋白2；2型糖尿病；基因多态性 0引言 β细胞功能减低和胰岛素抵抗是2型糖尿病（T2DM）发病的主要因子，其发生不仅受复杂的环境因素影响，而且受遗传因素影响，被认为是一类多基因遗传性疾病. 近年的研究显示解偶联蛋白2（UCP2）参与了能量代谢ATP的解偶联，其启动子区-866G/A多态性影响了胰腺β细胞功能，为糖尿病发生危险性的预测因子. 我们对中国北方汉族人群中UCP2 基因启动子区-866G/A多态性与T2DM及胰腺β细胞分泌功能的相关性进行研究. 1对象和方法 1.1对象糖尿病组（DM）：192名T2DM患者来自200503/200512西安交通大学第一附属医院内分泌科门诊及病房，诊断标准参考1999年世界卫生组织（WHO）的糖尿病诊断标准：空腹血浆葡萄糖水平（FPG）≥7.0 mmol/L和/或75 g葡萄糖耐量试验（OGTT试验）服糖后2 h血浆葡萄糖水平（PG2h）≥11.1 mmol/L. 所有患者年龄≥35岁，有严重心、脑、肝、肾功能损害及影响糖代谢的其他内分泌疾病者被排除在外. 非糖尿病组（NDM）：101名非糖尿病患者来自西安交通大学第一附属医院体检中心，年龄≥35岁，FPGlt;6.1 mmol/L并且PG2hlt;7.8 mmol/L，除外严重心、脑、肝、肾功能损害及糖尿病家族史者. 1.2方法 1.2.1一般观察指标记录两组患者的姓名、性别、年龄、发病年龄、病程、收缩压（SP）,舒张压（DP），并测定空腹总胆固醇（CHOL）,三酰甘油（TG）,高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白（LDL）,并计算体质量指数（BMI）. 1.2.2OGTT试验T2DM患者于夜间禁食8～10 h，于第2日清晨空腹服用75g葡萄糖，分别于0，30，60，120，180 min取静脉血，测定空腹血糖(FPG), 30 min血糖（PG30）, 60 min血糖(PG1h), 120 min血糖（PG2h）, 180 min血糖（PG3h）及空腹胰岛素(FINS), 30 min胰岛素（INS30）, 60 min胰岛素（INS1h）, 120 min胰岛素（INS2h）, 180 min胰岛素（INS3h）. 1.2.3胰岛素敏感性及分泌功能指标［1-3］胰岛素分泌指数(Homaβ)= 20×FINS/(FPG3.5)，胰岛素分泌指数(ΔINS30/ΔPG30)=(INS30FINS)/(PG30FPG)，新β细胞功能指数（MBCI）=(FPG×FINS)/(PG2h+PG1h7.0)，空腹血糖胰岛素乘积的倒数（IAI=1/(FPG×FINS). 1.2.4UCP2基因启动子区-866G/A多态性的PCRRLFP分析采用离心柱型血液基因组DNA提取试剂盒（北京天为时代科技有限公司）提取人基因组. 上游引物：5′CACGCTGCTTCTGCCAGGAC3′，下游引物：5′AGGCGTCAGGAGATGGACCG3′（ 北京奥科生物技术有限责任公司），PCR反应条件［4］：首先在95℃变性8 min，然后95℃变性1 min，65℃退火1 min，72℃延伸1 min，共35个循环，最后72℃延伸7 min. 使用2×Taq Plus PCR MasterMix（北京天为时代科技有限公