金丝桃素对ＨｅｐＧ２ 细胞体外杀伤效应探究.docVIP

金丝桃素对ＨｅｐＧ２ 细胞体外杀伤效应探究 　 作者：王晓利 张俊松 刘金钏 杨汝德 【摘要】 　　目的研究金丝桃素及贯叶金丝桃中金丝桃素提取物对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２ 的体外杀伤效应。方法通过测定胞内荧光强度以确定细胞对金丝桃素的吸收，用显微镜观察和ＭＴＴ 法研究金丝桃素及其提取物对细胞的生长抑制作用。结果光活化的金丝桃素对ＨｅｐＧ２ 细胞有显著的体外杀伤效应，其抑制细胞生长的能力与金丝桃素的浓度、给药与光照的时间间隔以及光照能量密切相关。结论金丝桃素及其提取物能明显抑制ＨｅｐＧ２ 细胞的生长，预示金丝桃素及其提取物在癌症治疗中有良好的开发研究前景。 【关键词】 金丝桃素 光动力治疗 肝癌 发光二极管 　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔ ｉｎ Hypericum performatum Ｌ．ｏｎ ＨｅｐＧ２ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｉｖｅｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．MethodsTｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ was investigated in HepG2 cells ｂｙ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｅｎｄｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ， ａｎｄ ａｓｓｅｓｓｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ hｙｐｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ the ｅｘｔｒａｃｔ ｂｙ ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ ＭＴＴ ａｓｓａｙ ．ResultsＬｉｇｈｔ －ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ the ｅｘｔｒａｃｔ had ｏｂｖｉｏｕｓ killing ｅｆｆｅｃｔ ＨｅｐＧ ２ ｃｅｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ， ａｎｄ ｉｔｓ effects were ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ with ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ， ｔｉｍｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ， ａｎｄ ａｌｓｏ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔ ｅｎｅｒｇｙ．ConclusionＨｙｐｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ the ｅｘｔｒａｃｔ ｃａｎ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ．Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ ｉｓ ａ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｎａｔｕｒａｌ ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ ａｎｄ ｓｈｏｕｌｄ ｈａｖｅ ａ ｇｏｏｄ ｐｒｏｓｐｅｃｔ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ. 　　Key words：Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ（ＨＹ）； Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ（ＰＤＴ）； Ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ； Ｌｉｇｈｔ －ｅｍｉｔｔｉｎｇ ｄｉｏｄｅ （ＬＥＤ） 　　金丝桃素（Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ，ＨＹ）是贯叶金丝桃Hypericum perforatum Ｌ．中的一种生物活性物质，结构为萘骈二蒽酮类化合物，是一种良好的光敏剂。研究表明，其具有抗抑郁、抗ＨＩＶ 及抗肿瘤等活性［１］ 。近年来，国外对金丝桃素在肿瘤的光动力治疗（ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ，ＰＤＴ）方面的研究开发十分活跃，但国内未见有关贯叶金丝桃中金丝桃素提取物在抗肿瘤方面的报道。本实验研究了金丝桃素和贯叶金丝桃中金丝桃素提取物对肝癌ＨｅｐＧ２ 细胞的生长抑制及诱导凋亡的作用。 　　１ 材料 　　人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２ 由国家生化工程技术开发中心提供；金丝桃素购于美国Ａｌｅｘｉｓ 公司，下简称ＨＹ，分子质量５０４．４５；贯叶金丝桃的金丝桃素提取物，下简称ＨＹ 提取物，由本实验室自制，经高效液相色谱分析金丝桃素的含量；ＲＰＭＩ －１６４０ 培养基为美国Ｇｉｂｃｏ 公司产品；小牛血清购于杭州四季青生物工程公司；胰酶－０．２５％ＥＤＴＡ 为美国Ｇｉｂｃｏ 公司产品；四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）购于北京鼎国生物技术有限责任公司；二甲亚砜（ＤＭＳＯ）为美国Ｓｉｇｍａ 公司产品；其余试剂为分析纯。 　　Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ２ 型连续光谱光密度荧光检测仪（美国Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ 公司），二氧化碳孵箱（德国Ｂｉｎｄｅｒ 公司），倒置荧光显微镜（德国Ｌｅｉｃａ 公司），光纤功率计（日本爱德万公司ＴＱ８２１０型），ＬＥＤ 光源（定制于深圳佳进光电技术有限公司），微孔板（美国Ｃｏｒｎｉｎｇ 公司）。 　　２ 方法 　　２．１ 细胞培养ＨｅｐＧ２ 细胞培养于含５％小牛血清、１００ Ｕ／ｍｌ 青霉素和１００ μｇ／ｍｌ 链霉素的ＲＰＭＩ －１６４０ 培养液中，３７℃，５％ＣＯ２ 及饱和湿度孵箱