随机扩增多态性DMA技术及简单序列重复标记法探析部分黄精属药用.docVIP

随机扩增多态性DMA技术及简单序列重复标记法探析部分黄精属药用 　作者：周晔，唐铖，张攻，李佩孚，王润玲 【摘要】 　　目的为黄精属部分药用植物建立聚类分析，对黄精属药用植物的分类进行研究。方法采用原植物鉴定、随机扩增多态性DNA（RAPD）、简单序列重复（ISSR）手段，对随机引物进行筛选，通过1.8%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。结果筛选23种RAPD引物，5种ISSR引物，经 PCR扩增产生足够的多态性谱带用于分析。结论采集不同产地的玉竹、小玉竹、多花黄精出现了一定程度的变异。RAPD，ISSR方法可以从分子水平区分黄精属药用植物。 【关键词】 黄精属；聚类分析；RAPD；ISSR 　　Abstract：ObjectiveTo establish the systematic cluster analysis for the relationship of the accessions of Polygonatum and give some information for the classification of plants which belong to Polygonature.Methods Identification of original plant, RAPD and ISSR were used. All of the samples were amplified by PCR system and separated by 1.8% electrophoresis. Results23 arbitrary premiers were evaluated for the analysis of RAPD, 5 arbitrary premiers were evaluated for the analysis of ISSR, the primers could yield enough polymorphic bands for the analysis. ConclusionThe plants such as P. odoratum, P. humile and P. cyrtonema collected from different areas also have some difference. RAPD and ISSR can be used for the identification of Polygonatum in molecular level. 　　Key words：Polygonatum; Systemic cluster analysis； RAPD； ISSR 　　黄精属在全世界约40种，我国有31种，分布于全国各地，尤以西南地区居多。2005版《中国药典》记载中药黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kongianum Coll.et Hemsl、黄精P. sibiricum Red.、多花黄精P. cyrtonema Hua.的干燥根茎。玉竹为百合科植物Polygonatum odoratum（Mill.）Druce的干燥根茎［1］。自1875年Baker将黄精属分为互生叶类Alternifolia、轮生叶类Verticillata、对生叶类Oppositifolia 3个类群之后，该属各种之间的关系至今仍存在争议，尚未见到较为全面的研究。Baker划分的这三个类群显然是不很合适的，过分地着重了叶序这个性状，从我国大量的材料来看，叶序这个性状并不十分稳定，在同一个种内都有变化［2］。Shian WU等［3］从形态学、细胞学、叶绿体DNA序列探讨了春水玉竹的位置，认为春水玉竹Polygonatum simizui Kitag.应从玉竹中划分出来，独立成种。临床使用中药黄精和玉竹时，也经常发现掺伪现象［4］ ，这与分类上的争议也有一定的关系。 　　随机扩增多态性DNA技术(Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD)是20世纪90年代发展起来的分子标记技术，能客观地揭示供试材料间DNA的差异，操作简便、快速。简单序列重复(Inter-Simple Sequence Repeat，ISSR.)分子标记是Zietkiewicz E在1994年提出的技术。具无需知道任何靶标序列的微卫星背景信息、遗传多态性高、检测快速的特点，经实验证明是可靠、且可提供有关基因组丰富信息的DNA指纹技术。为了获得稳定性、重复性与清晰度均较好的谱带，本文综合以上两种方法，查阅大量文献，自行设计引物，筛选出特异性引物，结合原植物鉴定，探讨了玉竹、小玉竹、黄精、长梗黄精、多花黄精的亲缘关系。 　　1 器材与方法 　　1.1 试剂 　　琼脂糖（Pr