侵染百合的李属死环斑病毒病（PNRSV）的研究.doc

侵染百合的李属坏死环斑病毒病（PNRSV）的研究 韩丽娟1，刘文洪2 （1北京出入境检验检疫局，北京100025；2浙江中医学院，杭州 310053） 摘要：【目的】在分子水平上鉴定百合上发生的李属坏死环斑病毒（Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV）【方法】对待测百合种球随机抽样，在温室内种植并观察，长出叶片后，用RNA Extraction Kit (Sangon, China)从幼嫩的叶组织中提取核酸，将反转录出的cDNA用 PNRSV的特异性引物进行PCR扩增，电泳PCR产物得到了450bp的目的片段。低熔点胶回收并克隆至pGEM-T-easy载体测序后进行序列比对分析。【结果】 从百合中所扩增的450bpcDNA的核苷酸序列与27个早期已报道的PNRSV分离物的CP 基因的同源性为84.5%～99.1%。【结论】百合是PNRSV的一新寄主。 关键词：百合；李属坏死环斑病毒；RT-PCR；检测 Studies on Prunus Necrotic Ringspot Virus (PNRSV) Occurred on Lily HAN Li-juan1, LIU Wen-hong2 （1Beijing Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing 100025; 2Zhejiang College of Traditional Chinese Medicine , Hangzhou 310053） Abstract: 【Objective】Molecular identification of Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV) occurred on lily was made. 【Method】Lily corms were randomly selected and grown in greenhouse. Total RNAs were extracted from young leaves with RNA Extraction Kit (Sangon, China), and partial amplification of CP gene was performed by RT-PCR with primer pairs specific for PNRSV. An expected cDNA fragment of about 450bp was harvested, cloned into pGEM-T-easy vector, sequenced and compared with 27 PNRSV isolates reported previously.【Result】The 450 bp cDNAs amplified from lily in this study shared 84.5%-99.1% homology with the 27 PNRSV isolates reported previously at the nucleotide level.【Conclusion】Lily is a new natural host of PNRSV. Key words: Lily; Prunus necrotic ringspot virus; RT-PCR; Identification 0 引言 【研究意义】李属坏死环斑病毒（Prunus necrotic ringspot virus，PNRSV），是影响核果类生产的最为严重的一类病毒[1]。该病毒最初的报道是在李子和桃上[2]，后来发现于甜樱桃和酸樱桃[3,4]，常引起果树的碎叶病[5]特别是对甜樱桃和（欧洲）酸樱桃危害尤为严重[6,7]。国际贸易和交流的日趋扩大使该病在世界范围内迅速传播和蔓延。目前，该病的发生已遍及欧洲、亚洲、非洲、南美和北美洲及大洋洲的40多个国家和地区。由于该病在国仅限于个别发生，属于《中华人民共和国进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录》中二类危险性有害生物，研究其寄主范围变化，可有效地降低其传入的风险。【前人研究进展】国外对PNRSV的研究报道较多除早期的发生与诊断外，采用分子生物学技术检测李属坏死环斑病毒并对病毒基因组序列进行测定也已成形RT-PCR和IC-RT-PCR已应用于PNRSV的检测[811]。国学者近年来也开展了对李属坏死环斑病毒的研究周媛月等在对陕西西安地区甜樱桃园的调查中首次报道了李属坏死环斑病毒在中国境内的发生情况[12]山东、辽宁两省也相继检测发现了PNRSV[13]；李青[14]等利用ELISA方法对北京地区的桃和樱桃上携带PNRSV的情况