以SELDI芯进行细胞标本蛋白分析的方法学研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（６）：７７８３ ? 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 檪 技术与方法 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 以ＳＥＬＤＩ芯片进行细胞标本蛋白分析 的方法学研究  马　可　王　琴　仉红刚 　张秋菊　修瑞娟 （北京协和医学院／中国医学科学院微循环研究所　北京　１００００５） 摘要　目的：探讨以ＳＥＬＤＩ芯片技术进行细胞标本蛋白分析的最适方法及条件，筛选细胞标本蛋白 表达差异。方法：对细胞标本分别用超声裂解法，Ｕ９细胞裂解缓冲液配方和自配细胞裂解液提取蛋 白，以ＢＣＡ法测定蛋白浓度；分别以磁珠活化后点样和生物芯片处理器点样使蛋白样品与芯片结 合；并对提取蛋白进行检测，比较不同蛋白浓度梯度点样及ＷＣＸ２，ＳＡＸ２，ＩＭＡＣＣｕ，Ｈ５０芯片捕获蛋 白差异，用ＷＣＸ２芯片筛选蛋白差异表达。结果：相同培养条件细胞以上述三种不同蛋白提取方法 获得的蛋白浓度分别为：０．２５±０．０３４ｇ／ｌ，０．６±０．０６ｇ／ｌ，１．０２±０．０７７ｇ／ｌ；生物芯片处理器点 μ μ μ μ μ μ 样法操作简单，要求样本量较少，点样时间短；ＳＥＬＤＩ芯片蛋白质峰图谱与蛋白浓度呈较好的正相 关；ＷＣＸ２，ＳＡＸ２，Ｈ５０，ＩＭＡＣＣｕ芯片捕获的蛋白质种类有较大区别；在分子量１０００～３０００００Ｄａ范 围内，以ＷＣＸ２芯片共检测到８７个差异蛋白峰，其中１７个呈趋势变化。结论：上述三种方法比较， 选用自配的细胞裂解液提取蛋白的浓度较高且更适于芯片研究；生物芯片处理器能较好地使蛋白与 芯片结合；ＳＥＬＤＩ芯片能准确定位蛋白，且其蛋白质峰与被测蛋白浓度呈正相关变化；ＳＥＬＤＩ各芯片 捕获蛋白类型不同，选择适宜芯片或联合运用芯片检测更易获得较理想蛋白差异表达结果。 关键词　ＳＥＬＤＩ　细胞蛋白 中图分类号　Ｑ８１９ 　　蛋白质在调节人体生命活动中扮演着重要的角 通过摸索ＳＥＬＤＩ技术的分析方法及适用条件，进行了 色，其表达受多环节多因素调控，患病人体细胞蛋白质 ＳＥＬＤＩ芯片技术的实验研究，为ＳＥＬＤＩ芯片技术进行 的组成及其变化常与正常状态下有很大差异。因此， 细胞标本来源蛋白质标本研究提供研究依据。 有效地鉴别细胞表达的蛋白质变化会为疾病的诊断和 ［１２］ １　材料和方法 药物的作用机制提供依据 。ＳＥＬＤＩ蛋白质芯片技 术，即表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（ｓｕｒｆａｃｅ １．１　样品细胞来源 ｅｎｈａｎｃｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓ 　　选用本实验室已有稳定培养体系的内皮祖细胞 ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＳＥＬＤＩＴＯＦＭＳ）是近几年迅速发展起来的 （ＥＰＣ）和本室培养的正常脐带静脉内皮细胞，内皮祖 用于蛋白质组学研究的一种新技术，它的出现为蛋白 细胞培养自人脐带血来源（合法取自北京协和医院足 质差异分析提供了新的有力工具。由于ＳＥＬＤＩ为新兴 月健康分娩的新生儿），经免疫组化鉴定，用于药物干 技术，其技术使用条件、标本制备等急需要研究，本文 预实验研究。 １．２　试剂和仪器 收稿日期：２０１００５０６　　修回日期：２０１００５１７ 科技部社会公益专项（２００５ＤＩＢ１Ｊ０８６）资助项目 　　人淋巴细胞分离液ＦｉｃｏｌｌＰａｑｕｅ（天津灏洋生物公 通讯作者，电子信箱：ｚｈａｎｇｈｇ