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GPR39 mRNA在糖尿病大鼠不同组织中表达水平差异 　【摘要】 　　目的 研究GPR39 mRNA在正常大鼠及糖尿病大鼠不同组织中的表达水平差异,探讨其在糖尿病发生发展中的作用。方法 采用实时荧光定量PCR仪检测正常大鼠与糖尿病大鼠胰腺组织、胃组织及肾脏中GPR39 mRNA相对表达水平。结果 与正常组相比，GPR39 mRNA在糖尿病大鼠胰腺组织中表达上调(Plt;0.05)，在胃组织表达下调(Plt;0.01)，在肾脏中表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 GPR39可能与内分泌功能及代谢功能有关,并且在糖尿病的发展中起保护作用。 【关键词】 GPR39；obestatin；糖尿病；荧光定量PCR；胰腺；胃组织；肾脏 　　糖尿病是一种具有明显遗传倾向的多基因疾病，其发病机制十分复杂，环境因素和遗传因素相互作用，共同促成了糖尿病的发生。近年来，与糖尿病相关的多种基因的研究广泛展开。GPR39是肥胖抑制素的受体，与内分泌及代谢功能密切相关。目前，关于GPR39在糖尿病大鼠不同组织中的表达差异与糖尿病发生发展的相关机制的研究还很少，研究〔1〕发现在空腹及STZ诱导的糖尿病大鼠脂肪组织中GPR39表达上调，在肝脏中却非常稳定，提示GPR39可能是改善代谢功能的一个靶点，在肝脏中GPR39可能还有一些其他的非代谢功能。目前尚未见糖尿病大鼠其他部位GPR39表达的研究报道，本研究采用实时荧光定量PCR仪检测正常大鼠与糖尿病大鼠胰腺组织、胃组织及肾脏中GPR39 mRNA相对表达变化情况，进一步探讨GPR39与糖尿病发生发展的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要材料 　　链脲佐菌素(STZ)，购自Sigma公司，Trizol试剂购自Invitrogen公司。SYBR R○PrimeScriptTM RTPCR试剂盒(DRR063A) 购自TaKaRa公司。EASY Dilution购自TaKaRa公司。仪器采用ABI7300实时荧光定量PCR仪。Wistar大鼠由山东大学实验动物中心提供。引物由上海生工合成。 　　1.2 动物分组及处理 　　110～130 g健康雄性Wistar大鼠30只。随机取15只作为正常对照组，其余15只造模。糖尿病模型采用腹腔注射STZ 60 mg/kg，对照组只注射相当体积的枸橼酸盐缓冲液。48 h后尾尖取血，测定血糖，血糖≥16.7 mmol/L者确定为糖尿病模型〔2〕，每周测血糖2次，不符合标准者弃去。各组均喂养2 w后处死，取胰腺、胃组织及肾脏经液氮速冻后保存于-80℃冰箱。 　　1.3 总RNA的提取及PCR反应 　　取-80℃冰箱保存的组织50～100 mg，液氮研磨，Trizol试剂提取总RNA。1%甲醛变性凝胶电泳检测其完整性，紫外分光度仪测定纯度和含量，OD260/280值1.9～2.1。PCR反应根据SYBR R○PrimeScript TM RTPCR Kit (Perfect Real Time)试剂盒说明。 PCR反应体系为：模板cDNA 2 μl，2 ×SYB R○Premix Ex TaqTM10 μl，ROX Reference Dye(50×) 0.4 μl，上下游引物各0.4 μl，加水至20 μl，每个样品重复3管。 所用引物根据文献〔3〕合成。GPR39引物：上游：5′AGT GAG GAG AGC CGG ACA G3′；下游：5′CAG TCA TGT TTG GGT TTT GC3′，扩增产物长度131 bp。βactin引物：上游：5′TTC TAC AAT GAG CTG CGT GTG3′；下游：5′GGG GTG TTG AAG GTC TCA AA3′，扩增产物121 bp。反应条件：95℃ 10s，95℃ 5 s， 62℃ 31 s,共40次循环。 　　1.4 统计学处理 　　所有数据均以x±s表示,并采用SPSS11.1统计软件进行数据整理和统计，两组间比较采用两样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 　 　　2 结 果 　　2.1 一般情况观察 　　实验组各大鼠血糖含量均在16.7 mmol/L以上。造模之前，大鼠毛色外观、活动、食欲及大小便等一般情况无明显异常及差异。造模后，糖尿病大鼠精神不振，活动较少，多饮，多食，多尿，消瘦，毛色发黄缺乏光泽。整个实验过程期间无大鼠死亡。 　　2.2 两组间GPR39 mRNA在不同组织的相对表达量变化 　　正常组胰腺组织GPR39 mRNA相对表达量为1，糖尿病组为1.77，糖尿病组表达上调，差异有统计学意义（Plt;0.05）。正常组胃组织GPR39 mRNA相对表达量为0.23，糖尿病组为0.10，糖尿病组表达下调，差异有统计学意义（Plt;0.01）。正常组