P6BMP2克隆及其在大肠杆菌中表达.docVIP

P6BMP2克隆及其在大肠杆菌中表达 　【摘要】 目的：在大肠杆菌中克隆和表达骨形态发生蛋白2（BMP2）的变体P6BMP2并初步纯化。方法：根据P6肽的氨基酸序列，按照大肠杆菌偏爱密码子将P6肽的核酸序列设计在5′端引物，通过PCR方法合成P6BMP2基因，并将其克隆到大肠杆菌表达质粒pALEX中，经NcoⅠ、XhoⅠ双酶切和DNA序列测定验证。结果：通过双酶切和DNA序列分析，证实获得的基因片段与我们期望的相符合，重组质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导获得表达。表达产物经超声破碎和Heparin SepharoseTM 6 Fast Flow亲和层析纯化，获得重组蛋白。结论：构建了P6BMP2的表达质粒，获得P6BMP2的表达并建立了纯化方式，为P6BMP2的深入研究和应用奠定了坚实的基础。 【关键词】 骨形态发生蛋白;P6;P6BMP2;大肠杆菌;胶原蛋白;表达 自1965年Urist[1]发现骨基质中含有能够诱导异位成骨的骨形态发生蛋白(bone morphogenefic protein，BMP)以来，研究者们经过大量动物实验和临床应用研究证实，BMP能在非骨组织如肌肉中诱导形成软骨和骨，是一种高效的骨诱导蛋白，其中BMP2被认为是活性最强的唯一能单独诱导骨形成的因子[2]。由于越来越多的实验证实了BMP2在诱导骨形成和骨修复方面的高效性及安全性，人们开