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保肾汤防治大鼠高脂血症致肾脏损害实验探究 　 作者：李慧 郑小伟 叶忠伟 李莉 【摘要】 [目的]探讨保肾汤防治高脂血症致肾脏损害的疗效及其作用机理。[方法]喂食高脂饲料造成大鼠高脂血症致肾脏损害，保肾汤(高、中、低剂量)同时干预给药12周，实验结束后，分别检测血脂、肾功能、肾脏病理、肾组织FN及TGFβ1、CTGF mRNA表达等指标。[结果]保肾汤能改善脂质代谢，降低肾脏指数，减轻肾脏病理变化，抑制肾组织FN产生及TGFβ1、CTGF mRNA表达的作用，以高剂量保肾汤作用最为显著。[结论]保肾汤能防治大鼠高脂血症致肾脏损害，其作用机理与抑制肾组织FN产生及TGFβ1、CTGF mRNA表达有关，并存在量效依赖关系。 【关键词】 保肾汤;高脂血症致肾脏损害;血脂;肾功能;肾脏病理;FN;TGFβ1;CTGF mRNA;实验研究 保肾汤由黄芪、淫羊藿、当归和大黄组成，合方共奏补益脾肾，祛除痰瘀之效。本研究旨在通过观察保肾汤对高脂血症大鼠血脂、肾功能、肾脏病理、肾组织FN及TGFβ1、CTGF mRNA表达的影响，以阐明其防治高脂血症所致肾脏损害的疗效及其作用机理。 　　1 材料 　　1.1 动物 清洁级Wistar雄性大鼠48只，一级质量标准，体重(180±20)g，由浙江中医药大学实验动物中心提供。 　　1.2 药品与试剂 胆固醇、胆酸钠：郑州利伟生物有限公司。保肾汤药物(黄芪、淫羊藿、当归、大黄)：浙江中医药大学中医门诊部。舒降之：杭州默沙东制药有限公司。总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、肌酐、尿素氮测定试剂：北京柏定生物工程有限公司。抗纤维连接蛋白(FN)抗体、抗转化生长因子β1(TGFβ1)抗体：福建迈新公司。RTRCR试剂盒(检测CTGF mRNA)购于上海生工生物技术服务有限公司。 　　2 方法 　　2.1 分组、造模及给药 实验大鼠先适应性饲养1周，然后随机分为6组：正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、舒降之组(C组)、保肾汤低剂量组(D组)、保肾汤中剂量组(E组)保肾汤高剂量组(F组)，每组8只。正常对照组每日喂食普通饲料，其余各组每日喂食高脂饲料(普通饲料中加3%胆固醇、1%胆酸纳、7.5%蛋黄粉和10%猪油配成);与此同时，舒降之组按1.7mg /kg.d灌胃给药，保肾汤低剂量组按10.35g /(kg·d)灌胃给药，保肾汤中剂量组按20.7g/(kg·d)灌胃给药，保肾汤高剂量组按31.05g/(kg·d)灌胃给药，保肾汤由黄芪、淫羊藿、当归、大黄按3∶1∶1∶1比例组合而成，用传统方法煎煮，去渣合并，过滤，浓缩，制成药液。用药各组采用等容积不等浓度药液每日给药1次。各组观察治疗12周。 　　2.2 检测指标 实验结束后，采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、肌酐(Scr)和尿素氮(BUN);称大鼠体重与肾重，计算肾脏指数;肾组织作HE染色，显微镜下观察肾脏病理变化;免疫组化Envision法检测肾组织FN及TGFβ1表达，采用三高CMIAS9813型多功能彩色计算图像分析系统对FN及TGFβ1进行半定量分析; RTPCR法检测CTGFmRNA表达情况，并以相对表达量来计算表达水平。 　　2.3 统计学处理 采用SPSS13.0 for Windows统计软件，对实验数据进行单因素方差分析，实验数据以平均数±标准差(x±s)表示。 　　3 结果 　　3.1 血脂情况 模型对照组血清TC、TG较正常对照组显著增高(Plt;0.01)，HDLC较正常对照组显著降低(Plt;0.01);保肾汤高剂量组血清TG较模型对照组、舒降之组明显降低(Plt;0.01);保肾汤各治疗组血清TC较模型对照组显著下降(Plt;0.01)，且高剂量组明显低于中剂量、低剂量组(Plt;0.05，Plt;0.01);保肾汤高剂量组血清HDLC较模型对照组显著升高(Plt;0.01)，且明显高于低剂量组(Plt;0.05)。详见表1。表1 各组大鼠血脂情况 　　3.2 肾功能情况 模型对照组Scr、BUN与正常对照组比较有上升趋势，但无显著性(Pgt;0.05);各治疗组Scr、BUN与模型对照组比较无显著性差异(Pgt;0.05)，但有下降趋势，以保肾汤高剂量组较为明显。详见表2。表2 各组大鼠血清BUN、Scr情 　　　3.3 肾脏病理、FN及TGFβ1情况情况 模型对照组肾脏指数较正常对照组显著升高(Plt;0.01)，系膜细胞增生，系膜基质增多，系膜区扩大，偶见肾小球局灶节段性硬化等;保肾汤高、中剂量组肾脏指数较模型对照组明显降低(Plt;0.01，Plt;0.05)，各治疗组系膜细胞增生、系膜基质增多及系膜区扩大等改变呈不同