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厄罗替尼对肺腺癌细胞凋亡影响 　 作者：白小燕 牟晓燕 姜淑娟 王亚丽 刘庆亮 【摘要】 目的 研究厄罗替尼对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响以及对表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达的影响。方法 采用MTT法检测不同浓度的厄罗替尼对A549细胞的增殖抑制作用;以倒置相差显微镜、流式细胞术、TUNEL法及DAPI荧光染色法检测细胞凋亡;以免疫荧光法分析厄罗替尼对EGFR蛋白表达的影响。结果 厄罗替尼抑制A549生长呈时间浓度依赖性;厄罗替尼处理A549后倒置相差显微镜、DAPI及TUNEL均见到明显的凋亡细胞(Plt;0.05);药物处理组使细胞发生明显的G1期阻滞(Plt;0.05);TUNEL检测到200 μmol/L厄罗替尼组细胞凋亡率为(42.13±1.4)%，显著高于对照组(0.82±0.03)%(Plt;0.05);免疫荧光法表明厄罗替尼明显下调EGFR表达(Plt;0.05)。结论 厄罗替尼杀伤A549细胞的机制与介导细胞凋亡、阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR信号途径有关。 【关键词】 厄罗替尼;EGFR;A549细胞;细胞凋亡 　　【Abstract】 Objective To explore the effects of Erlotinib on apoptosis andexpression of EGFR in human pulmonary adenocarcinoma cell line A549 cells. Methods MTT assay was used to determine A549 cells proliferation. Inverted microscope, flow cytometry, DAPI and TUNEL were used to detect apoptosis. The expression of EGFR was determined by immunofluorescence. Results Erlotinib inhibited the growth of A549 cells in a dosedependent and timedependent.The cells treated with Erlotinib showed a typical apoptotic morphology (Plt;0.05) and G1 phase arrestting(Plt;0.05). The apoptosis rate of 200 μmol/L Erlotinib group 〔(42.13±1.4)%〕 was significantly higher than that of control group〔(0.82±0.03)%〕 (Plt;0.05). Immunofluorescence assay showed that Erlotinib downregulated the expression of EGFR. Conclusions Erlotinib can kill A549 cells，owing to inducing apoptosis and G1 phase arresting and downregulating the expresion of EGFR. 　　【Key words】 Erlotinib;EGFR;A549 cell;Cell apoptosis 　 表皮生长因子受体(EGFR)在多数恶性肿瘤中常呈过度表达，而在正常细胞中很少表达，多项研究表明40%～80%非小细胞肺癌(NSCLC)存在EGFR过表达〔1〕。EGFR过表达预示存活率低、预后差、转移可能性大，表明EGFR信号转导通路的活化是肿瘤发生的最基本机制〔2〕。因此，从理论上说，利用EGFR抑制剂来治疗EGFR表达阳性的肿瘤应该具有良好的应用前景。厄罗替尼是一种口服的EGFR酪氨酸激酶拮抗剂，通过阻断NSCLC细胞生存、增殖中的某些信号转导通路而发挥作用〔3〕。本实验通过观察厄罗替尼在体外对A549细胞增殖、凋亡及EGFR蛋白表达的影响，探讨其作用机制，为厄罗替尼用于临床NSCLC的治疗提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞及主要试剂 人肺腺癌细胞株A549由山东大学附属省立医院中心实验室提供，胎牛血清(FCS)购自杭州四季清公司，RPMI1640 购自Gibco公司，二甲基亚砜(DMSO)、DAPI染液购自Sigma公司,厄罗替尼(Erlotinib，商品名特罗凯)由罗氏公司惠赠。EGFR兔抗人多克隆一抗购自奥博森公司，FITC标记羊抗兔IgG及DAB试剂盒购自北京中杉公司， Annexin V/PI 细胞凋