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地塞米松对急性过敏性哮喘小鼠肺水通道蛋白1影响 　 作者：吴葆菁， 李文益， 檀卫平， 麦贤弟， 黄花荣， 李静 【摘要】 【目的】 观察水通道蛋白1(AQP1)在急性过敏性哮喘小鼠肺组织的改变，以及地塞米松对其的影响。【方法】 建立小鼠哮喘模型，并随机分为3组，哮喘模型组、生理盐水对照组和治疗组，治疗组在激发阶段给予地塞米松治疗。检测各组中支气管肺泡灌洗液（BALF）的白细胞总数、分类计数以及IL-5和IFN-γ水平，用RT-PCR、Western blot和免疫组化法检测AQP1mRNA、蛋白质水平和在肺组织的分布，观察肺组织形态学改变。【结果】 (1) 哮喘组BALF中白细胞总数［（52±8）×106/ mL］、嗜酸性粒细胞数［（9.8±1.7）×106/ mL］和IL-5水平［(71±27) pg/mL］均高于对照组(P 均lt; 0.01)，IFN-γ水平［(294±26) pg/mL］低于对照组(P lt; 0.05)，治疗后白细胞总数、嗜酸性粒细胞数和IL-5水平均明显下降(P lt; 0.05，P lt; 0.01，P lt; 0.01)，IFN-γ水平明显上升(P lt;0.05)；（2）哮喘组AQP1mRNA（1.90±0.29）和蛋白质（1.31±0.10）明显高于对照组(P 均lt; 0.01)，治疗后表达明显下降(P lt; 0.01，P lt; 0.05)； (3)哮喘组肺组织可见较弥漫的炎性改变，黏液分泌增多，血管壁水肿明显，血管周围有大量的炎症细胞渗出物，治疗组形态学改变明显减轻；AQP1在气管黏膜上皮、微血管内皮上皮、支气管周围血管床、炎症细胞呈阳性表达，哮喘组表达呈强阳性，治疗后表达明显减弱。 【结论】 AQP1在急性哮喘小鼠肺组织内过度表达，地塞米松对其有显著的抑制作用，可明显改善小鼠肺部的炎性浸润和肺水渗出的病理生理过程。 【关键词】 过敏性哮喘； 水通道蛋白1； 地塞米松； 白细胞介素5； 干扰素γ 水通道蛋白1(aquaporin-1，AQP1)是20世纪80年代末Agre［1］发现的第一个水通道蛋白。AQP1在人体内分布广泛，存在于不同的组织器官中。AQP1表达和功能异常与某些疾病的分泌增多、水肿及变应反应密切相关［2-4］， 如脑水肿、肾病、变应性鼻炎等。AQP1是肺组织主要的水通道蛋白，是肺组织水转运功能中液体快速转运的通道，对于维持正常肺组织的通气和换气功能起重要用，现已公认水分子运动在哮喘发作时的气道阻塞中起重要的作用。但气道AQPｓ在的哮喘病理生理过程中的作用研究甚少，国内尚未见有关AQPs在哮喘中的作用的研究。本文通过实验观察AQP1在急性过敏性哮喘小鼠肺组织表达的改变，以及地塞米松对其的影响。 １ 材料与方法 1.1 实验动物 雌性C57BL/6小鼠30只，清洁级， 5～6周龄，体质量15～20(18±8) g，由中山大学实验动物中心提供。 1.2 实验材料 鸡卵白蛋白(ovalbumin OVA，Grade V，Sigma，美国)，Trizol（Invitrogen，America），逆转录试剂盒、Taq酶（MBI Fermentas，America），小鼠IL-5、干扰素-γ( IFN-γ)酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒、兔抗鼠AQP1多克隆抗体、生物素标记的羊抗兔链霉亲合素生物素酶复合物（武汉博士德工程有限公司），PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成。 1.3 实验方法 1.3.1 动物分组 30只C57BL/6小鼠随机分为3组，分别为OVA致敏/激发组（哮喘组）、生理盐水对照组（对照组）、地塞米松(dexamethasone，DM)治疗组（DM组），每组10只。 1.3.2 急性哮喘动物模型建立 急性哮喘动物模型的建立:方法采用国外文献［5］的方法加以改进，哮喘组、DM组分别于当天及第14天腹腔注射新鲜配制的1 g/L OVA与100 g/L氢氧化铝混悬溶液0.2 mL(1 g/L OVA 0.1 mL +100 g/L氢氧化铝0.1 mL)致敏，在21、22、23、29和30 d予1 g/L OVA溶液50 μL滴鼻吸入激发哮喘，小鼠出现烦躁不安或安静少动、呼吸加深加快，弓背，前肢缩抬、腹肌痉挛等阳性反应；DM组在2l、22、23、29和30 d滴鼻激发前30 min予地塞米松1.2 mg/kg腹腔注射；对照组同时给予相同体积生理盐水腹腔注射及滴鼻。 1.3.3 标本采集 最后1次滴鼻吸入激发后24～48 h，麻醉小鼠，剪开颈部皮肤，暴露气管、分离气管，经气管缓缓插入套管针，结扎固定，用1 mL注射器吸取0.6 mL磷酸盐平衡溶液（PBS），通过套管将PBS缓慢注入肺内，缓慢回抽，反复3次，收集全部支气管肺泡灌洗液（bronch