地尔硫艹卓、N乙酰半胱氨酸及过氧化氢酶联合应用对脊髓缺血再.docVIP

地尔硫艹卓、N乙酰半胱氨酸及过氧化氢酶联合应用对脊髓缺血再 　【摘要】 目的 探讨地尔硫艹卓、N乙酰半胱氨酸（NAC）和过氧化氢酶（CAT）联合应用对兔脊髓缺血再灌注（I/R）损伤的保护作用。方法 阻断肾下腹主动脉及髂动脉建立兔脊髓I/R损伤模型，治疗组经阻断动脉灌注地尔硫艹卓、NAC和CAT混合盐溶液,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx），观察实验兔行为学变化及损伤病理变化，并与单纯手术组作对照。结果 治疗组SOD和GPx活性高于对照组，而MDA水平低于对照组(Plt;0.05)。病理学检查发现脊髓出血和神经细胞破坏治疗组较对照组轻。治疗组神经行为学评分优于对照组(Plt;0.01)。 结论 在脊髓缺血后应用地尔硫艹卓、NAC和GPx的混合盐溶液可以有效减少脊髓I/R损伤造成的损害。 【关键词】 脊髓缺血；截瘫；缺血再灌注损伤；主动脉阻断 　　脊髓损伤(SCI)是一种严重中枢神经系统损伤。其病因包括脊柱骨折脱位，锐器伤或火器伤，以及主动脉、脊柱或盆腔等部位的手术中因阻断脊髓供血动脉所致的缺血再灌注（I/R）损伤。据报道胸主或胸腹主动脉瘤术后截瘫的发生率高达6%～40%〔1，2〕，尽管国内外学者已采用如脑脊液引流、左心转流、血管移植转流及深低温停循环等多种措施保护脊髓，但仍无法完全避免术后截瘫的发生〔3，4〕。因此，脊髓I/R损伤的药物保护措施成为众多学者的研究重点。研究发现过氧化氢酶（CAT）、N乙酰半胱氨酸（NAC）在脊髓I/R损伤中均能起到保护作用〔5，6〕，但钙离子通道阻滞剂地尔硫艹卓在这方面的研究报道并不多见。本研究旨在探讨地尔硫艹卓、NAC及CAT联合应用对脊髓I/R损伤方面的保护作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　实验动物为国产雄性大耳实验兔20只（由解放军第208医院实验动物中心提供），兔龄8个月，体重2.2～3.8 kg（平均2.9 kg），随机分为2组，每组10只。仪器与试剂：紫外分光光度计（SHIMADZU岛津UVmini1240），无损伤血管夹，咬骨钳，电子体温计（欧姆龙 MC142L），丙二醛(MDA)检测试剂盒（S0131）、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)检测试剂盒（S0056）、超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（S0060）均购自碧云天生物技术研究所。 　　1.2 方法 　　1.2.1 术前准备 　　术前8 h禁食，初始镇静采用盐酸塞拉嗪注射液（4 mg/kg）。5 min后，用氯胺酮（40 mg/kg）肌注维持麻醉。动物置于电热毯加热的手术台上防止体温过低，持续直肠测温，体温维持在37.5℃～38.5℃，术中耳缘静脉建立通路。手术开始前输入生理盐水20 ml(稀释青霉素80万U)，继而输入乳酸林格氏液，根据情况调整输液速度维持血容量。 　　1.2.2 动物模型的建立 　　动物右侧卧于手术台上，无菌条件下取左竖脊肌外侧缘直切口，腹膜后间隙钝性分离并显露腹主动脉、左肾动脉。耳缘静脉注射肝素钠（150 U/kg），3 min后，首先夹闭远端腹主动脉，然后用血管夹阻断左肾动脉开口下方0.5 cm处腹主动脉。对照组动脉阻断30 min，治疗组动脉阻断30 min并经两个血管夹之间动脉灌注地尔硫艹卓（0.25 mg/kg）、CAT（10 000 U/kg）、NAC（50 mg/kg）氯化钠溶液(6 ml/kg)。两组均30 min后松开血管夹（松夹时间3 s）对脊髓进行再灌注，并静点硫酸鱼精蛋白（1 mg/kg）以拮抗肝素的作用。动脉灌注部位以70无创线缝合，皮肤以30丝线缝合。 　　1.2.3 行为学观察评分 　　再灌注48 h后采用Tarlov评分标准对下肢行为进行评估〔7〕。0级：后肢无活动，不能负重；Ⅰ级：后肢可见活动，但不能负重；Ⅱ级：后肢活动频繁或有力，不能负重；Ⅲ级：后肢可支持体重，能走1～2步；Ⅳ级：可行走，仅有轻度障碍；Ⅴ级：行走正常。 　　1.2.4 标本采集及处理 　　再灌注48 h，全麻状态下取俯卧位，后正中切口，逐层剥离椎旁肌，暴露出各段棘突，以咬骨钳咬断棘突和椎板，暴露至脊髓硬膜，分离并取出脊髓L3～L6节段。 　　1.2.5 病理学检查 　　取L5～L6脊髓石蜡包埋、制片。通过HE染色，观察脊髓内出血及神经细胞破坏情况。 　　1.2.6 生化指标测定 　　取L3～L4脊髓分别存储于-80℃冰箱中，检测前每份组织中加入三羟甲基氨基甲烷10 ml，每1 g脊髓组织匀浆化后以5 200 r/min，4℃离心10 min。分别取上清液存储于-80℃冰箱中，采用TBA法测定MDA含量，黄嘌呤过氧化物酶法测定SOD活性，操作步骤均参照各试剂盒说明书。 　　1.3 统计学分析 　　用SPSS13.0数据统计软件，均数采