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地锦草提取物对红色毛癣菌酶活性影响 　 作者：安惠霞，李治建，古力娜·达吾提，斯拉甫·艾白 【摘要】 目的研究地锦草提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的影响，探讨其抗真菌作用机制。方法药物干预红色毛癣菌后分离菌体，按试剂盒要求处理样品，利用酶联免疫法和荧光分光光度法，研究地锦草提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性的作用。结果地锦草提取物256 μg·ml-1时，可显著降低红色毛癣菌中角鲨烯环氧化酶的活性(Plt;0.01);不同浓度的地锦草提取物，均可降低红色毛癣菌β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的活性(Plt;0.01)。结论地锦草提取物抗真菌机制可能与抑制角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的活性有关。 【关键词】 地锦草提取物; 角鲨烯环氧化酶; 酶联免疫吸附试验; β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶; 荧光分光光度法 　　Abstract：ObjectiveTo study the effect of Euphorbia humifusa extract(EHE) on squalene epoxidase and β-(1,3)-D-glucan synthase of T.rubrum and its mechanism. MethodsTreated T.rubrum with EHE, studied the effects of EHE on squalence epoxidase activity in T.rubrum cell membrane by ELISA test and β-1,3-glucan synthase activity in T.rubrum cell wall by fluorospectrophotometry. ResultsThe ELISA test results showed that squalene epoxidase activity was decreased significantly(Plt;0.01, vs growth control) in T.rubrum when the concentration of EHE was 256 μg·ml-1. The fluorospectrophotometry test results showed that β-(1,3)-D-glucan synthase activity was decreased significantly in T.rubrum treated with low, middle and high concentrations of EHE(Plt;0.01, vs growth control). ConclusionThe antifungal mechanism may be related to its inhibition on squalene epoxidase and β-(1,3)-D-glucan synthase activity in fungus. 　　Key words：Euphorbia humifusa extract; Squalene epoxidase; Elisa test; β-1,3-D-glucan synthase; Fluorospectrophotometry 　　红色毛癣菌T.rubrum是临床常见的皮肤癣菌，也是浅部真菌病的主要病原菌，其中69.5%的皮肤癣菌病是由红色毛癣菌感染所致[1，2]。地锦草Euphorbia humifusa是维吾尔医常用药材，临床主要用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣及银屑病等[3]。文献报道[48]，地锦草具有显著的抗真菌作用，尤其对毛癣菌属Trichophyton的红色毛癣菌最敏感。为了探讨地锦草提取物抗皮肤癣菌的作用机制，本实验研究了地锦草提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶活性和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的影响，为地锦草的开发利用提供实验依据。 　　1 材料 　　1.1 药物地锦草提取物(EHE，批号，由新疆维吾尔医药研究所药剂室提供，提取方法及质量控制，参照《中华人民共和国药品标准·维吾尔药分册》中百癣夏塔热片之地锦草提取方法及质量控制[9]，用二甲基亚砜(DMSO)溶解制成浓度为102.4 mg·ml-1的储存液，存于-60℃冰箱备用。 　　1.2 菌株红色毛癣菌T.rubrum 1株，菌株编号：XYZ T.r 40001，由新疆医科大学真菌与真菌病研究中心菌种保藏库(XYZ)提供。 　　1.3 试剂RPMI-1640培养基和三氮吗啡琳丙磺酸(MOPS)，美国Gibco公司产品;沙堡氏琼