射干麻黄汤对支气管哮喘大鼠肺组织细胞因子表达影响.docVIP

射干麻黄汤对支气管哮喘大鼠肺组织细胞因子表达影响 　【摘要】 目的 探讨射干麻黄汤对支气管哮喘大鼠肺组织转化生长因子（TGF）β1表达的影响方法 采用免疫组化、NYD1000型图像分析软件半定量测定TGFβ1表达并对各组大鼠支气管肺病理组织学HE染色进行观察及定量分析。结果 射干麻黄汤组支气管肺病理组织学指标改善优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01)；TGFβ1表达明显低于桂龙咳喘宁组(P＜0.01)。结论 射干麻黄汤可以通过减少TGFβ1表达减轻炎症反应,抑制气道重塑，对支气管哮喘起到很好的治疗作用。 【关键词】 哮喘；射干麻黄汤；嗜酸性粒细胞；嗜酸性粒细胞阳离子蛋白；白细胞介素 支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞和淋巴细胞等多种炎症细胞参与的慢性气道炎症。研究发现,转化生长因子β1(TGFβ1)在气道重塑的过程中起着重要的作用,可诱导成纤维细胞向肌成纤维母细胞转化,促进气道胶原沉积和基底膜增厚〔1〕。本文观察了中药射干麻黄汤对支气管哮喘大鼠肺组织TGFβ1表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 药物试剂 射干麻黄汤由射干、麻黄、生姜、细辛、紫菀、款冬花、五味子、大枣、半夏组成,由我院中药房提供。卵蛋白:美国Sigma公司生产。氢氧化铝:天津市化学试剂三厂生产,分析纯化。 　　1.2 动物分组及给药 清洁级SD大鼠(哈尔滨医科大学实验动物中心提供)32只，随机分为4组,即正常组、模型组、射干麻黄汤组、桂龙咳喘宁胶囊对照组(桂龙咳喘宁组),每组8只。各治疗组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每天灌胃给药(剂量见表1),正常组、模型组予0.5%的羧甲基纤维素钠溶液灌胃,每日1次,连续4 w。 　　1.3 模型建立 除正常组外，各组大鼠腹腔内注射10%卵蛋白和10%氢氧化铝混合液1 ml,致敏后第15天用1%卵蛋白喷雾激发大鼠哮喘发作,隔日1次,每次20 min,共激发4 w〔2〕。大鼠出现呼吸加快、口唇发绀、腹肌痉挛、点头呼吸及站立不稳等表现为激发成功。正常组以生理盐水腹腔注射及雾化吸入。 　　1.4 检测指标及方法 取麻醉后动物肺中叶甲醛固定，脱水、包埋、切片,分别做HE染色。光镜下观察，参照文献测量大鼠气道壁的面积，并用气管内周长进行标准化。采用NYD1000型图像分析软件测定完整支气管管腔的内周长(Pi)、管壁面积(WA)、支气管平滑肌的面积，用Pi进行标准化，分别以WA/Pi、支气管平滑肌的面积/Pi表示支气管管壁厚度、支气管平滑肌厚度；同时测定每高倍视野(400倍)的EOS、淋巴细胞数。采用免疫组化半定量测定TGFβ1表达,石蜡切片常规脱蜡脱水,微波抗原修复,过氧化氢甲醇溶液灭活内源性过氧化物酶,滴加正常山羊封闭液,室温30 min,各组分别滴加1∶80配置的兔IgG多抗,4℃过夜,磷酸盐缓冲液(PBS)洗净后,滴加生物素标记的二抗工作液,37℃反应20 min,PBS洗净后加辣根酶标记的链酶卵白工作液,37℃反应20 min,PBS洗5 min，共4次,室温显色,镜下控制反应时间约10 min左右,洗净后苏木精复染,树胶封片。计算机图像处理软件半定量测定TGFβ1表达(以染色吸光度值表示)。 　　1.5 统计学分析 采用SPSS11.5软件进行统计处理,统计方法用单因素方差分析。 　　　2 结果 　　正常组大鼠肺组织偶见炎细胞浸润，管壁完整，黏膜未见充血水肿，管壁和平滑肌厚度正常。与正常组比较，模型组大鼠可见支气管壁及血管、支气管周围有大量EOS、淋巴细胞等炎性细胞浸润(P＜0.01),支气管黏膜水肿、增厚、上皮脱落、微血管渗漏、管腔内分泌物增多,基层细胞增生、平滑肌增厚(P＜0.01),肺泡间隔变宽。与模型组比较,各治疗组EOS、淋巴细胞等炎性细胞浸润明显减少(P＜0.01),肺组织充血、水肿现象减轻,管壁和平滑肌厚度明显减少(P＜0.01),肺泡腔较宽,肺泡间隔较窄；射干麻黄汤组病理组织学指标改善优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01)，见表1。 　　模型组大鼠肺组织中TGFβ1表达（247.0±18.6）明显高于正常组(143.4±18.9)(P＜0.01),与模型组比较,射干麻黄汤组（163.2±19.1）及桂龙咳喘宁组（211.1±28.2）TGFβ1表达均降低(P＜0.01,P＜0.05),并且，射干麻黄汤组TGFβ1表达明显低于桂龙咳喘宁组（P＜0.01)。 　　表1 各组大鼠病理组织学指标的比较（略） 　　与模型组比较:1）P＜0.01;与桂龙咳喘宁组比较:2）P＜0.01 　　3 讨论 　　TGFβ1是TGFβ超家族中的一员,主要存在哺乳动物的肺、肾及胎盘组织中,肺组织的TGFβ1主要由气道上皮细胞、成纤维细胞及EOS产生〔3，4〕。研究