小鼠大脑中动脉梗死模型VERGE 蛋白表达变化及其机制.doc

小鼠大脑中动脉梗死模型VERGE 蛋白表达变化及其机制 　 作者：王赞 姜宏宇 纪莉 林卫红 【摘要】 目的 探讨VERGE蛋白在小鼠大脑中动脉梗死模型(MCAO)中蛋白表达的变化及其机制。方法 C57BL/6小鼠30只，随机分为2组：30 min MCAO模型组、90 min MCAO模型组，制备MCAO模型，应用激光多普勒血流仪进行术中脑血流监测，应用Western 印迹法观察各组梗死侧及非梗死侧的VERGE、pJNK2、pERK1/2、P38蛋白表达的变化。结果 30 min、90 min MCAO模型组梗死侧VERGE、pJNK2 的蛋白表达明显增高，pERK1/2、P38蛋白表达无变化;两组MCAO模型非梗死侧的VERGE、pJNK2、pERK1/2、P38蛋白表达均无变化。结论 VERGE 蛋白表达在小鼠MCAO的早期明显升高可能与JNK2通路有关而与ERK、P38通路无关。 【关键词】 VERGE;大脑中动脉梗死;机制 　　【Abstract】 Objective To study the protein expression and its mechanism of VERGE in MCAO mice models. Methods The mice were divided into 30 and 90 min MCAO groups. All mice were made into MCAO models. The protein expressions of VERGE, pJNK2, pERK1/2, P38 were tested by Western blot. Results The protein expressions of VERGE, pJNK2 of both groups in ischemia hemisphere were increased, while the protein expressions of pERK1/2, P38 had no change. There were no protein expression changes of VERGE, pJNK2, pERK1/2, P38 in the nonischemic hemisphere of both groups. Conclusions The protein expression of VERGE is increased in the transient MCAO models , the mechanisms of which may be related to JNK2. 　　【Key words】 VERGE; Middle cerebral artery occlusion (MCAO); Mechanism 　　 血管早期反应基因(VERGE)可以快速、选择性地表达在成熟脑的血管内皮细胞，与血管的形成及发展密切相关，可以作为一种即早基因调控〔1〕。VERGEE 编码一个73个氨基酸的区域与Apol有30%的同源性，在缺血缺氧时迅速爆发，通过PKC 引起MAPK蛋白表达的变化，但其细胞信号传导的机制尚不完全清楚。本研究拟建立小鼠大脑中动脉梗死(MCAO)模型，观察VERGE及pJNK2、pERK1/2、P38蛋白表达的变化，进一步明确脑缺血后VERGE表达变化及其信号传导的通路。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 实验过程按照瑞士政府实验动物保护条例进行，C57BL/6小鼠为苏黎世大学附属医院动物室提供。共分2组：30 min MCAO组;90 min MCAO组,每组10只。A组为30 min MCAO模型非梗死侧;B组为30 min MCAO模型梗死侧;C组为90 min MCAO模型非梗死侧;D组为90 min MCAO模型脑梗死侧。 　　1.2 VERGE 由Jean B博士赠给Dirk.M.Hermann 教授。 　　1.3 小鼠MCAO模型制备〔2〕 各组大鼠采用1% Isoflorin 气体麻醉,应用恒温仪使直肠温度保持在37℃，分离结扎左侧颈总动脉和颈外动脉，将带有硅胶的8.0尼龙线从颈总动脉插入颈内动脉，长度为9 mm，阻断大脑中动脉血流，A、B组在30 min将尼龙线撤出,C、D组90 min将尼龙线撤出，进行再灌注。 　　1.4 激光多普勒血流仪(LDF)监测 在实验过程中脑血流用0.5 mm光纤探头进行监测，右大脑中动脉区位置为囟门旁开6 mm，后2 mm，只有LDF的血流值降低到15%～20%，再灌注血流恢复到50%左右为梗死再灌注模型成功。 　　1.5 Western 印迹分析 将两组梗死侧及非梗死侧脑组织