幽门螺杆菌感染及环氧合酶2表达及胃癌变关系.docVIP

幽门螺杆菌感染及环氧合酶2表达及胃癌变关系 　【摘要】 目的： 探讨胃黏膜幽门螺杆菌(helicobactor pylori, H.pylori)感染、环氧合酶2(COX2)的表达与胃癌发生、发展的关系. 方法： 胃癌(GC)标本80例，非典型增生(Dys) 40例，萎缩性胃炎(CAG) 30例，肠上皮化生(IM) 30例，浅表性胃炎(CSG) 30例，应用免疫组化方法测定COX2蛋白的表达，用亚甲兰染色检测H.pylori. 结果： CSG，GC中H.pylori阳性和阴性病例COX2表达差异无统计学意义(Pgt;0.05),但在CAG，IM，Dys中的H.pylori阳性病例中COX2表达高于H.pylori阴性病例（52.9% vs 7.6%，52.6% vs 9.0%，67.9% vs 33.3%）. 结论： H.pylori感染诱导COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段. 【关键词】 胃肿瘤 癌前状态 螺杆菌 幽门 前列腺素内过氧化物合酶 0引言 胃癌的发生是一个多阶段、多因素的复杂发展过程. 至今，病因还没有完全研究清楚，但近年的大量研究证实，H.pylori感染是胃癌病因中最重要的环境因素之一，H.pylori感染诱导一个复杂免疫反应，首先炎细胞聚集，然后导致增生，细胞因子释放，最终导致分子改变. 在被H.pylori上调的靶基因中，COX2在胃癌进程中起重要作用，因此，COX2与肿瘤的关系倍受关注，COX2 是一种诱导型酶,其与肿瘤的发生、发展有密切关系,并且可作为预防、治疗肿瘤的靶分子,对其检测具有重要的临床意义. H.pylori感染及其诱导的COX2表达在胃黏膜病变转变过程中的相关性尚不清楚. 我们检测chronic superficial gastritis,chronic atrophic gastritis,intestinal metaphasia,dysplasia和gastric carcinoma标本中的H.pylori感染和COX2蛋白的表达，探讨H.pylori感染及其诱导的COX2在不同胃黏膜病变中的表达情况，探讨其表达与胃癌发生、发展的关系，为胃癌的早期诊断及治疗提供依据. 1对象和方法 1.1对象200501/200612病理确诊存档组织蜡块，术前未放、化疗，年龄28~90（中位58）岁. 男125例，女85例. 其中GC标本80例，CSG 30例，CAG 30例，IM 30例，Dys 40例. 常规制备4 μm连续切片4张，兔抗人COX2多克隆抗体、免疫组化SABC试剂盒及DAB显色试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司. 亚甲兰溶液配制：亚甲兰11 g，硼酸1 g加蒸馏水100 mL. 1.2方法免疫组织化学染色采用SABC法： 新鲜配置H2O2孵育；微波修复抗原；滴加BSA封闭液，室温30 min. 甩去多余液体，不洗；每张切片加1滴或50 μL第一抗体，4℃孵育过夜；滴加二抗，37℃下孵育20 min，PBS冲洗，5 min×3次；滴加试剂SABC，37℃下孵育20 min; PBS冲洗，5 min×3次；DAB显色：每张切片加2滴或100 μL新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察5~10 min; 蒸馏水冲洗；自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，中性树胶封片. COX2阳性染色主要位于细胞胞质中,呈棕黄色弥漫性分布，间质细胞(炎性细胞、内皮细胞及成纤维细胞)和平滑肌细胞中亦可见散在部分表达，通过光学显微镜每张切片摄取5个高倍视野，计数阳性细胞个数，计算阳性细胞率， 以≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,76%~100%为4分，着色强度0分为阴性,1分为浅棕黄色（弱阳性）,2分为棕黄色（阳性）,3分为深棕黄色（强阳性）. 每张切片的染色积分以这两者的乘积表示. 另HP染色：石蜡切片61℃烤片40 min，脱蜡，梯度水化. 亚甲兰溶液中染色1 min. 水洗凉干后用中性树胶封固. H.pylori在400倍高倍镜下观察，以切片中腺腔内找到深兰色单个或多个聚集的短棒状、弧状、“S”状杆菌为阳性（+），否则为阴性. 统计学处理：组间率的比较采用χ2检验或精确概率法，Plt;0.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1胃黏膜感染率在CSG，CAG，IM，Dys，GC中H.pylori感染率分别为23.3%(7/30),56.7%(17/30),63.3%(19/30),70%(28/40),35%(28/80). CAG，IM，Dys的H.pylori感染率与CSG相比差异有统计学意义（χ2=6.94,χ2=6.71,χ2=10.60, Plt;0.01）. GC的H.pylori感染率与