核酸的生物合成1.ppt

1um 重组基因片段 基因枪 黄金子弹 靶细胞 基因枪法 ——动植物细胞基因重组 在特殊培养基上（如含有青霉素）筛选目的细菌 质粒上具有抗性基因 如抵抗青霉素 长出必然是重组成功的细菌 筛选 PCR技术即Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应。(体外DNA扩增法) 由Mullis于1985年发明 基本原理：在模板DNA链、引物和4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）存在下依赖于DNA聚合酶（Teq酶）进行的酶促合成反应。 每轮反应分为三个阶段：变性、复性、延伸，约30轮循环后DNA可扩增几百万倍 2、PCR技术与DNA的扩增 ②依赖ρ因子 2、真核细胞的转录过程 转录基本过程与原核生物相似,但更复杂! RNA聚合酶: 类别 分布 产物 RNA聚合酶Ⅰ 核仁 rRNA(18s; 5.8s) RNA聚合酶Ⅱ 核质 mRNA RNA聚合酶Ⅲ 核质 tRNA; 5s rRNA 线粒体RNA聚合酶 线粒体 线粒体RNA 叶绿体RNA聚合酶 叶绿体 叶绿体RNA 转录因子 功能 起始阶段 RNA聚合酶Ⅱ 催化RNA合成 TBP(TATA盒结合蛋白) 专门识别TATA盒 TF Ⅱ A 稳定TFⅡB和TBP对启动子的结合 TF Ⅱ B 结合于TBP;组装polⅡ-TFⅡF复合物 TF Ⅱ D 和正调节、负调节蛋白相互作用 TF Ⅱ E 组装TFⅡH；ATP酶和解旋酶活性 TF Ⅱ F 紧密结合于PolⅡ,结合TFⅡB,防止RNA聚合酶结合于非特异DNA顺序 TF Ⅱ H 启动子DNA解螺旋,磷酸化RNA聚合酶,组装核苷酸切割修复复合物 延长阶段 ELL P-TEFb SⅡ (TF Ⅱ S) 延长蛋白(S Ⅲ) 转录后加工包括： ①切除多核苷酸片段 ②化学修饰某些碱基 ③添加一个或多个核苷酸 ④大分子RNA分裂为小分子RNA 3 转录后加工 （1）rRNA前体的加工 甲基化,内切酶 16S 4S tRNA 23S 5S tRNA 23S rRNA 16S rRNA 5S rRNA 原核 30S 前体 pre-rRNA tRNA 17S 25S 内切酶 核酸内切酶 18S rRNA 5.8S rRNA 28S rRNA 甲基化 18S 5.8S 28S 真核 45S 前体Pre-rRNA （2 ） tRNA前体的加工 碱基修饰 ①剪切： ④修饰： ③加臂： ②剪接： 原核生物mRNA不需任何加工，转录同时可以马上进入翻译。 真核生物转录时产生均是没有活性的RNA前体，必须经过加工过程： ①5’-帽子的形成 ②3’-poly(A)尾 的形成 ③内含子的切除：真核细胞内进行，过程复杂，切除内含子的过程称为RNA的剪接。 （3） mRNA前体的加工 ① 5’-帽子结构的形成 5’-帽子结构在转录 结束前添加 5’-帽子结构 ---m7GpppmNp ② 3’-poly(A)尾巴的形成 3’-尾巴包含 80 ~ 250 A残基. poly(A) 尾巴通过 一个剪接步骤添加 由多聚A聚合酶催化 mRNA-DNA 杂交体（鸡卵清蛋白基因） ③ RNA 剪接 断裂基因:编码序列不连续的间断基因。 RNA内含子有四种类型。 由初级转录物去除内含子,将外显子连接,产生一个 成熟的、有功能的RNA. A、 I 型内含子的剪接通过两步亲核的反应 (核、线粒体、叶绿体 --rRNA, mRNA, tRNA B、 II 型内含子与Ⅰ型类似 真菌、藻类和植物线粒体 与叶绿体mRNA的前体 C、Ⅲ型内含子需要 RNA-蛋白复合物 --- snRNPs( 细胞核小核糖体蛋白) Ul, U2, U4, U5, U6 核mRNA内含子 D、 Ⅳ型内含子需要 ATP 内切酶 -----核tRNA内含子 2 RNA的复制 概念： RNA指导的RNA合成 Qβ噬菌体→E.coli后→(逆转录酶)， → RNA复制酶，专一识别病毒RNA，并以其作为模板，合成新RNA，合成方向：5’→3’ 3 RNA的降解 mRNA 的水平取决于其合成与分解的速度. 不同mRNA分子的半衰期是不一样的(降解速度不一致). mRNA 分子的平均半衰期 细 菌 1.5 minutes 脊椎动物 3 hours 1、基因工程（DNA重组技术） （一）概念：基因工程也称遗传工程。是用人工方法在体外进行基因重组（定向拼接、组合），把重组的基因导入受体细胞进行复制，转录和翻译