法舒地尔（HA-1077）对人骨髓间充质干细胞向表皮细胞表型分化影响初步的研究.pdfVIP

中文摘要 是决定向脂肪和肌形成过程中的关键分子开关，并认为对于 MSCs的分化可能同样具有意义。 在诱导MSCs向表皮细胞分化过程中，本实验选择 尔)，通过对Rho／ROCK信号途径的干预，利用体外细胞培 养、免疫细胞化学、流式细胞仪等技术，从细胞生物学、细 胞表型表达等方面来观测其对人骨髓f司充质干细胞(human stem cells，hMSCs)向表皮细胞分化的影响。 mesenchymal 目的 皮细胞表型分化的影响。 方法 取、培养并扩增hMSCs，流式细胞仪测定细胞表面CD34、 CD44表达。 2采用儿童新鲜包皮组织帖壁培养纤维细胞并收集上清液 3体外诱导MSCs向表皮细胞表型分化的实验分为4组：① FBs／DMEM+30％人成纤维细 胞上清液 +lOng／mlEGF+I咄mol／L HA一1077)。 +lOng／mlEGF+30“mol／L 4流式细胞仪检测鉴定分组诱导2天后hMSCsCK5／8表达。 中文摘要 表达并观察缁脆形态变化，具体操作按试剂盒说明书进行。 和PCNA、P．ERK的阳性率及细胞周期变化。 7采用SPSSl3．0软件对数据进彳亍统计学处理，多个样本均数 比较选用单因素方差分析、两两比较选用最小显著麓法。 p0．05被认为有统诗学意义。 结果 股骨MSCs均一性良好，流式细胞仪检测结果湿示CD34阳 性率约为0+12％，C矜44辫性率约为91．53％。 2分组培养48h后各组细胞形态无明显变化，流式细胞仪鉴 ①和②③④组差癸均有统计学意义(p0，05，p0。01， 渐提赢。 3诱导后4天免疫细胞化学显示：各诱导组细胞形态仍无明 显变化，免疫细胞《乞学染色可见MSCs@无c鲻稻熬表达， 余各组均呈现不同程度的CK5／8的表达，以MSCs③④培养 基诱导豹表达最多。帮第2天流式缨胞仪溅定结果一致。 4诱导7天后流式细胞仪测定表明，Mscs①②③④四组中 上升趋势，{笙三种角蛋白的比较中：HA～1077作用前、后即 单纯诱导前、后即MSCs①与②组比较均有统计学意义 中文摘要 (pO．05)。 5流式细胞仪显示诱导7天后单纯诱导组即MSCs@组与 HA～1077作用组＆p 处予G0／Gt期豹纲悠逐激减少，处于S甥兹魄镶上升；其中 作耀静、羼帮MSCs@缀与③组比较(妒0+01)差异显著。 6诱导7天后流式细胞术结果漫示HA-1077作用前、后即 MSCs②缀与③缉之阎的P．ERK阳性表达率比较差异显蓑 (p0．01)。 结论 j采褥密度梯凌离心法可得到成份均一、纯度高豹hMSCs， 经流式细胞仪鉴定具有MSCs的表面橡志。 2证实MSCs在体矫特定条件下诱导可发生简表皮纲施酶转 CKl0／13、CKl9的阳性表达率。 3 HA-1077在体外条件诱导下能使hMSCs增殖能力提高， 分化能力增强，大部分瞻Gl期转变为S期，促进hMSCs 向表皮细胞分化中扮演煎要角色。 关键词：骨髓干细胞；法舒地尔；角蛋A；细胞周期； P．E歉K 荚文摘要 EffectsofHA．1077onDifferentiationof Bone Marrow StemCellsinto Mesenchymal Epidermic Cells ABSTRACT Thebonemarrow stem mesenchymal active and multi。differentiatethatcan self-proliferative