X-线照射对肺癌转移相关基因MMP-9及E-钙粘素表达影响.pdfVIP

引言 X一线照射对肺癌转移相关基因MMP-9及E一钙粘素表达的影响 引言 1895年物理学家伦琴发现了X线及1896年居里夫人发现了镭，使放射线的生 物学效应很快得到了认识。1899年放射治疗了第一例肿瘤病人，从此开创了放射 治疗的历史。目前放射治疗是癌症治疗最有效的方法之一。肺癌的发生率和死亡 率皆位于恶性肿瘤的前三位且发病时大约2／3的患者己失去手术机会，因此放疗 已成为肺癌的主要治疗手段。侵袭与转移是恶性肿瘤最本质的特征之一，也是导 致肿瘤患者死亡的主要原因Ⅲ。它涉及肿瘤细胞与宿主两方面一系列、多步骤的 复杂过程。据统计，40％的肺癌患者初诊时已有淋巴结转移，确诊后肺癌5年的生 存率不超过13％这与肺癌易发生侵袭、转移有关乜1。黏附分子、基质金属蛋白酶 matrix， 等与肿瘤发生、发展及侵袭、转移的关系密切。细胞外基质(extracell ECM)的降解被认为是肺癌侵袭正常组织和开始转移的信号及重要途径。癌细胞 破坏间质，沿血管和淋巴管道扩散至不同器官或同一器官的不同区域，导致转移 发生。这包括癌细胞从原发灶脱离、穿过基底膜(basementmembrane，BM)和 lular 细胞外基质(extracelmatrix，ECM)、穿透血管或淋巴管、在血液或淋 巴液中存留、离开循环并停留在新的部位、新生血管生长、形成转移灶等若干步 骤口1，而癌细胞对ECM的降解和穿透BM是发生浸润转移的起始步骤。ECM的主要成 分是Ⅳ型胶原，肿瘤细胞可产生多种蛋白酶降解ECM，其中最重要的是基质金属 metal 蛋白酶(matrix 解ECM的所有成份，促进癌细胞对周围正常组织的侵袭，导致肿瘤的扩散和转移。 的重要粘附分子。实验研究已证实E-Cad基因是一个重要的肿瘤转移抑制基因， 它可能通过促进同型细胞之间的粘附，使癌细胞之间保持密切接触，减少癌细胞 脱离原发灶向远处转移H1。目前放射治疗肺癌侵袭、转移作用机制尚不十分清楚。 本实验旨在探讨X一线照射对Lewis肺癌小鼠MMP-9及E一钙粘素表达的影响，为放射 治疗在临床上的应用提供更多的理论依据。 第一章材料与方法 第一章材料与方法 1．1研究对象 置于我院SPF级动物室饲养。 1．2实验过程和标本采集 1．2．1细胞培养 (1)材料 细胞株：购于中国科学院上海生命科学研究所 DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶等细胞培养用试剂购自GIBCOBRL公司。 (2)试剂 DMEM培养液：将干粉型培养基溶于欲配制液体总量2／3的三蒸水中，冲洗包 装袋两次倒入培养液中，加磁性搅拌棒并置于磁力搅拌器上充分搅拌，以确保培 la111、0．22lam双层滤纸超滤消毒。洁净工作台内分装，置4℃备用。用前，37 ℃温水浴温化处理，并加入温化处理(56℃30分钟)的灭活胎牛血清至其终浓度 为10$，以后DMEM培养液4℃保存：灭活胎牛血清一20℃保存，用时现配。 PBS液：将干粉溶于1000ml三蒸水中，加磁力棒并置于磁力搅拌器上充分 搅拌。分装后高压灭菌消毒，置4℃备用。 调整PH值调至7．2左右，-20℃保存。 (3)实验仪器 C02孵箱、医用洁净工作台、低速自动平衡离心机、台式高速离心机、倒置 显微镜、电子天平、电热恒温水浴锅、架盘药物天平、深低温冰箱。 2 青岛大学硕士学位论文 (4)细胞传代 观察细胞呈单层生长约铺满瓶底90％时，按1：3传代。洁净台内操作，弃 尽原培养液，加适量灭菌PBS液洗细胞后弃去；加少许0．25％胰蛋白酶消化液， 消化约lmin：加3ml预温的完全DMEM培养基，用吸管吸取培养液均匀吹打培养 瓶底壁，使细胞脱离：将细胞悬液分装入3个培养瓶中(或弃去2／3细胞悬液)， 补加适量培养基于瓶中，轻摇匀，置细胞培养箱内培养。 (5)细胞换液 根据细胞营养需求情况定期更换培养基(培养基变黄)。洁净台内操作，弃 原培养液3／4，加入5ml预温的完全DM