动物细胞培养和核移植技术(上课用)1.ppt

动物细胞培养和核移植技术 动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 4、动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 5、动物细胞培养应用 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 作为基因工程中的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 * 第一课时 提问： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养, 植物体细胞杂交 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 1 、动物细胞培养的概念 动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 处理分散成单个细胞 （幼龄动物的器官、组织或胚胎） 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞，使细胞从瓶壁脱落 适宜条件 2.动物细胞培养的过程 细胞 悬浮液 细胞贴满瓶壁 50代 细胞 原代 培养 传代 培养 ⑴原代培养: 将动物组织经胰蛋白酶等处理后的初次培养。 ⑵传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 动物组织 单个细胞 细胞悬液 贴壁生长 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 不死细胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数癌变 少数 动物细胞培养技术流程 失去接触抑制现象 细胞核型不变 当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖—细胞出现接触抑制。 哪些细胞失去了接触抑制？ 传代培养时，少数超过50代的细胞，由于遗传物质发生改变，可无限增殖，并失去了接触抑制——肿瘤细胞。 ⑶接触抑制 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 50代细胞 细胞株 无限传代（不死性） 细胞系 遗传物质改变 遗传物质未改变 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ P46讨 论 充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。） 适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境 保证细胞顺利的生长增殖 维持培养液的PH 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体或组织 培养结果 获得细胞 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 第二课时 动物细胞培养和核移植技术 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易； 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 1.动物细胞核移植概念： （难度高） 卵母细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 多莉羊的培育过程 融合后的卵母细胞 2、体细胞核移植的过程： 请看教材P48图2-21 思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ MⅡ中期卵母细胞 诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成 细胞分裂和发育进程。 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞