促红细胞生成素对小鼠黑色素瘤细胞B16体内外增殖及免疫功能调节作用的研究.pdf

讨论……………………………………………………………………50 参考文献………………………………………………………………51 综述 促红细胞生成素及其受体在肿瘤发生发展中的作用……………．54 致谢…………………………………………………………………………62 个人简历……………………………………………………………………63 中文摘要 促红细胞生成素对小鼠黑色素瘤细胞B16体内外增殖 及免疫功能调节作用的研究 摘 要 目的：检测小鼠黑色素瘤细胞株B16促红细胞生成素受体 (erythropoietin 白表达的关系。观察EPO体内外对免疫功能调节作用。以期对EPO合理 用于临床治疗肿瘤相关性贫血和预后判断提供理论基础。 方法：1采用逆转录．聚合酶链反应(revers PCR， transcdption RT-PCR)、免疫荧光和激光共聚焦显微镜(1aser scanningmicroscope， LSM)、免疫印迹(westemblot)等方法检测B16细胞EPORrnRNA和蛋 白的表达。 及其与达卡巴嗪(1、10、50、100 gg／m1)和顺铂(O．5，l，10，100gg／m1)， 联合应用时对B16细胞生长的影响。 3采用流式细胞技术(flow 10、100U／锄)作用24小时后对B16细胞周期的影响。 4采用western 细胞Bcl．2、Bcl．xL、Bax蛋白表达的影响。 5建立B16细胞移植瘤模型，从接种细胞第5天起，分别用EPO、 观察肿瘤细胞在小鼠体内的生长情况。部分小鼠于停药后次日摘除眼球取 白细胞(WBC)水平。并引颈处死小鼠，剥离瘤体，分别称量瘤重。部 分小鼠用于生存期观察。 6将上述正常对照组、盐水处理组和EPO处理组部分小鼠，药物处 理两周后处死。观察各组小鼠脾脏指数、脾脏单个核细胞CD4+、CD81 细胞亚群的分布、血清IL-2和TNF．仅细胞因子的水平。 中文摘要 和细胞因子分泌的影响。 结果：1B16细胞表达EPORmRNA和蛋白。 2 亡作用(胗O．05)。 3流式细胞技术分析结果显示，EPO可增加B16细胞S期的百分率， 减少Go／G1期细胞比例(氏O．05)。 4Western 未见明显变化(胗0．05)。 5EPO处理组小鼠的肿瘤体积和重量与盐水处理组相比没有统计学 和重量与盐水处理组相比显著缩小(氏O．01)，但该两组小鼠间的肿瘤体 积和重量没用统计学差别(胗O．05)；DDP处理组小鼠的肿瘤体积和重量 6 血清中Ⅲ．2水平与盐水处理组相比增高(氏0．05)，但该两组小鼠血清中 TNF．a含量无差别(尸O．05)； TNF．a和几．2含量无明显影响(胗O．05)。 结论：1B16细胞表达EPORmRNA和蛋白。 2EPO可明显促进B16细胞增殖，这种促增殖作用可能与其影响细胞 中文摘要 周期发展有关。EPO还可调节化疗药对B16细胞的抗肿瘤活性，这种作 用与化疗药的类型有关。 3EPO对B16细胞的促增殖和调节化疗药抗肿瘤活性的作用，可能与 EPO影响Bcl．2家族蛋白表达有关。 4EPO的应用对黑色素瘤细胞在小鼠体内的生长没有明显影响；但 药的类型有关。 5EPO可通过改善机体贫血状态调节小鼠的免疫功能。 关键词：促红细胞生成素；促红细胞生成素受体；黑色素瘤；B16细 胞；化疗；白细胞介素．2；肿瘤坏死因子．仅；T淋巴细胞增殖功能 英文摘要 Effectsof on ofmurinemelanoma erythropoietinproliferation c