郜刚分子生物学06生物信息的传递1转录的观点酶学原核启动子.ppt

第03章 生物信息的传递（上） ——从DNA到RNA ●补充资料 ●基本概念和基本观点 ● 转录机器的主要成分：RNA聚合酶、启动子 ● 转录的基本过程 ● 转录后加工 ● 原核生物与真核生物mRNA的特征比较 ● RNA合成与DNA合成异同点 ● 转录后修饰等 这里值得注意的是： 有关几个符号的意义，是国际生物化学命名委员会规定： R ＝ G，A Y ＝ C，T M ＝ A，C (带氨基) K ＝ G，T (带酮基) W ＝ A，T (弱) N ＝ A，C，G，T D =G、A或T P = U, C B=G、T或C H=A、C或T V= G、C或A 此外，对于氨基酸序列，除了20种常见氨基酸的标准单字符标识之外，B代表Asp或Asn；U代表硒代半胱氨酸；Z代表Glu或Gln；X代表任意氨基酸；“*”代表翻译结束标志。 生物体以DNA为模板合成RNA的过程 。 转录定义的详细解释 1.在生物体内，转录并不是形成RNA的唯一途径 2：参与转录的物质复杂 原料: NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) 模板:DNA 酶: RNA聚合酶 其他蛋白质因子 4. 转录的连续性 5.转录的不对称性： 在RNA的合成中，DNA的二条链中仅有一条链可作为转录的模板，称为转录的不对称性。 关于单链DNA病毒/噬菌体（M13 phage） 正链：单链噬菌体基因组的那条单链， 负链：单链噬菌体进入寄主后复制成双链，是以正链为模板复制了一个互补链，这条互补链叫做负链。 转录单元（transcription unit） 3.1 RNA转录的基本过程 详细过程后面讲述 3.2 转录机器的主要成分3.2.1 RNA聚合酶 1 原核生物RNA聚合酶 以E.coli为例： 该酶由5个亚基组成：α2ββ’σ。有时还看到另外一个亚基即ω，它的功能还不清楚。α2ββ’这样的整个酶分子称为核心酶，核心酶与σ亚基结合后称为全酶。σ的最主要的功能是识别启动子，β亚基的功能是参与同底物的结合并且催化磷酸二酯键的形成，β’亚基的功能是与有义链结合，α亚基可以参与全酶和启动子的结合。除了RNA聚合酶之外，转录还需要有其它的因子的参与，比如释放因子ρ等。 1960-1961年几乎同时由S.Weiss,J.Hurwitz和Audrey Sterens在E.coli及各种真核和原核细胞中发现了RNA聚合酶。 另外在真核生物的细胞器中，如线粒体、叶绿体中都有自己的RNA聚合酶系统，但是它们都是由核基因编码的。 表3-1 大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 2. 真核生物RNA聚合酶 ● 真核生物RNA聚合酶 真核生物的RNA聚合酶 有三种：即 RNA聚合酶I、II、III。其中， RNA聚合酶I存在于核仁中，其功能主要是负责合成5.8S rRNA, 18S rRNA, 28S rRNA； RNA聚合酶II存在于核质中，负责合成mRNA和snRNA； RNA聚合酶III也存在于核质中，其功能是合成tRNA,和5S rRNA以及转录某些特殊序列如Alu序列。 RNA聚合酶晶体结构：显示模板进入转录复合体的途径 真核RNA 聚合酶II 为例 补充资料：RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别 典型启动子的结构 －10序列 pribnow box 该序列位于转录起始点上游－10b处，其保守序列为TATAAT，它是RNA聚合酶的牢固结合位点，简称为结合位点，由于RNA聚合酶的诱导作用，pribnow box中的DNA双螺旋首先熔解形成单链泡状，结果形成所谓的开放性启动子复合物，从而为RNA聚合酶定向，使之按照顺流方向移动而行使其转录功能。因此这个序列的碱基组成能够影响启动子开放的速度，从而影响到转录的速度。 根据这一点来看，既然-10序列是RNA聚合酶的牢固结合位点，难道说还有不牢固结合的位点吗？ 实际上的确如此，这就是-35序列。 RNA聚合酶大的很，不仅能够覆盖这一区域而且能够覆盖另外一个重要的区域即是sextama box。 该序列位于pribnow box的上游，－35b处，又叫作－35序列，其保守序列为TTGACA，这段序列是RNA聚合酶的识别位点，RNA聚合酶靠σ识别该位点。当然也是RNA聚合酶最初结合启动子的位点。 CAP位点 这是一个调控位点，即环腺苷酸受体蛋白位点。但这个位点并不是所有的启动子都有的。 以大肠杆菌乳糖启动子为例，CAP位点有两个，一个位于-70到-50，另一个位于-50到-40。至于这两个CAP位点是起什么作用的，以后我们在基因表达调控中再详细地讲述。 上面主要讲述了原核生物操纵元的主要序列启动子，因为它与转录关系十分密切，所