第四章dna的复制(简).pptVIP

第四章 DNA的复制 目 录 第一节 DNA复制概况 第二节 DNA复制的酶学 第三节 DNA复制的起始 第四节 DNA复制的延伸 第五节DNA复制的终止 第一节 DNA复制概况 一、半保留复制 二、复制原点、方向和方式 三、DNA聚合反应 四、DNA复制的半不连续性 DNA半保留复制实验（M. Meselson和F. Stahl，1958年 ） 二、复制原点、方向和方式 1. 复制原点(ori)：复制是从DNA分子上的特定位置开 始的, 这一位置叫复制原点。 Figure A replication eye forms a theta structure in circular DNA. 2. 复制方向：大多数双向进行，也有单向，或以不对称的 双向方式进行。 E.coli: 双向等速 细菌：双向 噬菌体T7：双向 枯草杆菌、线粒体DNA、质粒R6K：不对称双向 质粒ColE1: 单向 3. 复制方式 （1）复制叉式 （2）滚环式复制 三、DNA聚合反应 Poly(核苷酸)n-3’-OH+dNTP Poly(核苷酸)n+1-3’-OH+2Pi 四、DNA 复制的半不连续性 先导链：DNA复制时，复制叉一股链上的DNA合成总是 比另一股超前一步，称为先导链。 后随链：复制叉上另一股链的复制要比先导链滞后 一 步，称为后随链。 冈崎片段：后随链的不连续合成中形成的短DNA片段称 为冈崎片段。 一、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase,DDDP) 简称：DNA-pol 三、引发酶 DNA的复制必须以RNA为引物，合成RNA引物的酶叫做引发酶。 SSB功能： 1. 保护单链DNA不受降解 2. 避免单链内形成氢键 3. 提高ssDNA对Pol的亲和力 4. 与螺旋酶作用（可能促进作用） 五、旋转酶 E.coli的拓扑异构酶II 解除拓扑学障碍 E.coli的复制速率：1000核苷酸/s 第三节 复制的起始 原核生物DNA的复制（E.coli) 复制体形成过程（E.coli） 1. DnaA结合在9bp处 2. 20-40个DnaA聚合在一起形成核心 3. DnaA作用于13bp处 4. DnaB/DnaC结合在13bp处 DnaB六聚体与6个DnaC结合 需ATP （二）复制复合物的改型 1. DnaC + ATP 稳定DnaB 2. ATP水解，DnaC从ori脱离 3. DnaB活化 4. DnaB取代单链上的DnaA 5. DnaB边移动边打开DNA双链 6. SSB与ssDNA结合 （三）引发体的形成 1. 模板解链 2. 引发酶加入 3. 形成引发体 4. 合成RNA引物 （四）复制体的组装 1. 在gamma复合物的帮助下，beta滑动钳组装到引发的DNA上 2. 提高核心酶与ssDNA的亲和力 3. Tau 进行二聚化 4. 边移动边合成DNA 大肠杆菌复制体结构示意图 第四节 复制的延伸 第五节 复制的终止 当子链延伸达到terminus region（ter，带有多个20bp序列）时，DNA复制就终止了。Ter有点像一个陷井（trap），使复制叉只能进入，不能出来。Ter的功能主要是由Ter-Tus复合物（ter utilization substance）来完成的。 大肠杆菌染色体复制的终止 二、线形DNA复制的终止 重点、难点 1.复制的条件 2.复制的酶学：DNA-Pol I、III, 真核生物DNA-Pol 3.复制过程 4. 冈崎片断，Klenow片断，滚环式复制，复制子，复制叉，复制原点，先导链，后随链， 难点：复制起始、延伸及终止三大过程 主要包括两个不同但相互有联系的事件，即前导链和滞后链的合成。由DNA helicase解开双螺旋，由拓朴异构酶消除DNA链上的扭曲力，SSB结合使DNA单链稳定。 ??? 前导链的合成：由DnaG（primase）在复制起始位点附近合成一个10-60 nt的RNA引物，然后由polII把dNTP加到该引物上。 ??? 滞后链的合成：产生Okazaki fragments，消除RNA引物并由DNA pol I补上这一小段DNA序列，由DNA Ligase把两个片段相连。