第六节 原核生物的基因重组.pptVIP

3. 大肠杆菌的接合型及接合 细菌遗传重组单向过程和F因子的提出 F－菌株 F＋菌株 Hfr菌株 F因子结构图: 相对分子质量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛及控制接合过程进行的20多个基因。 图中黄色区域表示转座子，通过这些部位可以整合进细菌染色体上形成各种Hfr菌株。 Hfr菌株: 细胞中的F质粒整合到核染色体组上, 及F－ 菌株相接合后，发生基因重组的频率比任何已知的F＋ 与F－ 接合后的频率高出几百倍，这种“雄性”菌株称为Hfr。 在Hfr菌株及F-细胞进行接合时, OriT序列被缺刻螺旋酶识别而产生缺口后，F因子的先导区(leading region)结合着染色体DNA向受体细胞转移，F因子除先导区以外，其余绝大部分是处于转移染色体的末端，由于转移过程常被中断，因此F因子不易转入受体细胞中，故Hfr×F-杂交后的受体细胞大多数仍然是F-（即不能使受体菌变成供体）。 接合中DNA转移过程有着稳定的速度和严格的顺序性 。 染色体上越靠近F因子的先导区的基因，进入的机会就越多，在F-中出现重组子的的时间就越早，频率也高。 中断杂交（interrupted mating）技术和基因定位 利用Hfr×F-的接合过程，在不同时间取样，并把样品猛烈搅拌以 分散接合中的细菌，然后分析受体细菌基因型，以时间(分钟)为 单位绘制遗传图谱，该图谱是细菌染色体上基因顺序的直接反映。 左图: 不同Hfr菌株的形成方式，以不同的起点不同的顺序转移基因。（a）细菌染色体为环状，可以不同的IS位点打开，F质粒插入进去。 （b） Hfr菌株的部分基因顺序。 大肠杆菌基因组很大（全部转移需要100分钟），其遗传图谱须用多株F因子整合在不同位置的Hfr菌才能完成 基因定位：通过遗传重组等手段确定不同的基因在染色体上的位置及相对距离，从而获得遗传图谱。 连锁的二基因间的距离及其共转化，或共转导的频率成反比，因此，可根据二个基因被共转化或共转导的频率判断它们在染色体上的相对距离。 接合作用（中断杂交）作图只能判断相距较远的基因间的相对位置；转导、转化则可用于对相隔很近的基因进行定位； 大肠杆菌 遗传图谱 目前对大肠杆菌的染色体已定位了1000多个基因 F′菌株 F′菌株: Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因子。 细胞表面同样有性菌毛。 F′×F-及F+×F-的不同：给体的部分染色体基因随F′一起转入受体细胞 细胞基因通过F′和F-的接合而实现转移的过程常称为性导（sexduction）、F因子转导，或F因子介导的转导（F-mediated transduction）。 F′所带的基因可以及染色体发生重组；也可以继续存在于F′因子上。 F质粒的四种存在方式及相互关系 接合 (conjugation)： 细胞及细胞的直接接触（由F因子介导） 转导(transduction)： 由噬菌体介导 自然遗传转化(natural genetic transformation)： 游离DNA分子 + 感受态细胞 “接合” “转导” 及“自然转化”这三种在自然界中 存在的细菌遗传重组过程各自的特点： a）外源DNA的来源及进入途径有差异； b）决定因素也各有不同； 如何设计实验对三种途径进行区分？ 第六节 原核生物的基因重组 基因重组（gene recombination）： 将两个不同性状个体的基因通过一定的方式转移到一起，并发生重新组合，产生新的遗传性状的过程，称为基因重组(gene recombination)或遗传重组。 重组：遗传物质在分子水平上发生的交换； 杂交：在细胞水平上遗传物质的交换. 杂交必然包含着重组，但重组不仅限于杂交这一形式。 原核生物的基因重组类型 4种形式：1）转化 2）转导 3）接合 4）原生质体融合 一、 转化（transformation） 定义：受体细胞直接吸收供体细胞的DNA片段, 并及其染色体同源片段进行遗传物质交换，从而使受体细胞获得新的遗传性状的现象。 转化子（ transformant）：经转化后出现了供体性状的受体细胞称为转化子，即转化成功的菌落。 目前已知有二十多个种的G+和G-细菌具有自然转化的能力 此过程可以发生在土壤和海洋环境中，可能是自然界遗传交换的重要方式。 自然遗传转化（natural genetic transformatio