发酵工艺学实验指导(中国药科大学生命科学与技术学院).pdf

中国药科大学 生命科学与技术学院 发酵工艺学实验指导 中国药科大学 微生物制药教研室 2009.12 目录 实验一 玻璃器皿的包扎和洗涤 实验二 培养基的制备和灭菌与消毒 实验三 普通光学显微镜的构造和使用方法 实验四 纯培养方法—分离、接种、无菌操作基本训练 实验五 自然分离 实验六 物理因素诱变育种 实验七 化学因素诱变育种 实验八 理化因素复合处理的诱变育种 实验九 原生质体的制备、再生 实验十 土霉素发酵 实验十一 谷氨酸发酵工艺 实验十二 菌种保藏 实验十三 新抗生素产生菌的筛选(系统示教) 实验十四 发酵过程中间参数的测定与分析 实验一 玻璃器皿的包扎和洗涤 [实验目的] 1．熟悉微生物实验所需的各种常用器皿名称； 2 ．掌握对各种器皿的清洗和包扎方法。 [实验材料] 1．常用各种玻璃器皿 2 ．清洗工具和去污粉、洗衣粉、洗液。 [实验方法] 一、器皿洗涤注意事项 1．任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有损伤，所以不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能 使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。 2 ．一般新的玻璃器皿用2 ％的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分冲洗干净。 3．用过的玻璃器皿应立即清洗，有时放置过久会增加洗涤的难度。 4 ．难洗涤的玻璃器皿不要与易洗涤的器皿放在一起；有油的器皿不要与无油的器皿放在一 起，否则使本来无油的器皿也沾上了油污，浪费药剂和时间。 5 ．强酸、强碱、琼脂等能腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒入废液缸 内。 6 ．含有琼脂培养的器皿，可先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培养基刮去或把它们用水蒸煮， 待琼脂融化后趁热倒出，然后用清水洗涤。 二、洗涤方法 1．染菌或盛有微生物的玻璃器皿（特别是病原菌），洗涤前，应放入高压灭菌器内 121℃ 高温下灭菌20～30 分钟。取出后，倒出器皿内之培养物，用去污粉刷洗干净，再用自来水冲洗．以 水在器皿内壁均匀分布成一薄层，而不见水珠时，为油垢除净的标准。 含有凡士林或蜡的玻璃器皿，在未洗前，应尽量除去油腻．必要时可用5 ％苏打水煮沸两次， 再用肥皂或去污粉刷洗。 经过这样洗涤的器皿，可盛一般实验用的培养基和无菌水等。如果要盛纯的化学药品或作较 精确的实验时，则应先用洗涤液浸泡．再用自来水洗刷，还需蒸馏水洗刷三次，烘干备用。 2 ．带菌的移液管或毛细管，用完后，应立即投入 5 ％的石碳酸溶液中过夜，先行灭菌，然 且用自来水冲洗。 3 ．新的载玻片或盖玻片，先在把皂水(或2 ％的盐酸溶液) 内浸泡一小时，再用水洗净，以软 布擦干后浸于95 ％酒精中，保存备用。已用过的载玻片或盖玻片，先用纸擦去油垢，再放在5 ％ 的肥皂水中(或1％的苏打水中)煮10 分钟后，立即用自来水冲洗到无色为止，最后用蒸馏水换洗 数次，洗后烘干冷却或浸于95 ％酒精中保存备用。 三、器皿包扎 为使灭菌后仍能保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。 1．培养皿洗净后每l0 套叠放在一起，用牢固的纸卷成一筒，外面用绳子捆扎，以免散开。 2 ．凡准备吸菌液用的吸瞥，在其末端先墓一小段棉花，以防止菌液误吸入口中，及口中的 微生物吹人吸管而进入培养物中造成污染，塞人棉花的量要适宜，露在管口外的多余的棉花可用 酒精灯的火焰把它烧掉。每支吸管用一条宽约4～5cm 的纸条包扎，包装时要注意头部先包，最 后多余的纸条可打一结，以防松脱，标上容量。 3 ．试管、三角瓶要做合适的棉花塞，棉花塞的制作要求使棉花塞紧贴玻璃壁，不能过松或 过紧，棉花塞的长度不少于管口直径的二倍，约三分之二塞入管口，棉花外用报纸或牛皮纸包扎， 包扎好的器皿，均需进行灭菌，使用时需在无菌室内才可除去包装纸。