多效因子对培养葡萄细胞及其次生代谢产物的影响.pdfVIP

20世纪30年代组织培养技术得到了飞速发展，使细胞在植物体外进行无限生长成 为可能。1939年，Wlite等提出非分化的植物细胞可以无限期地进行继代培养，并 成功地对烟草、萝卜、杨等形成层组织进行了培养，使植物组织培养技术真正由 级代谢产物；1949年，Caplin等指出离体培养的高等植物细胞具有合成天然产物 L鼓泡塔反应器培养植物细胞生产有用 Nichell在专利申请中，详细介绍了利用30 次生代谢产物质的方法：1959年，Tuleeke和Nickell用20L通气硫酸瓶进行了蔷薇 (Rosa印)、银杏(Ginkgobiloba)、冬青(胁x叼甜矿D，f“聊)等植物细胞的悬浮培养【5】； 1964年，中国学者罗士伟首次成功地进行了人参组织培养；1967年，Kaul等通过 大规模培养牙签草∽mmi visnaga)细胞，得到了次生代产谢物呋喃色酮，为其后的 研究树立了成功典范。近四十年来，有关植物细胞培养尤其是植物细胞大规模培 养的研究得到了越来越多学者的重视，相关报道日益增多。与此同时，该技术在 生产领域的应用也备受企业家的关注【6J，这些都极大地推动了植物细胞培养技术 的发展。 然而，随着研究工作的进一步深入，植物细胞大规模培养技术遇到了许多棘 手的问题，如与微生物相比植物细胞生长速度缓慢、有效成份含量较低、对剪切 力更为敏感、遗传稳定性也较差等，在一定程度上限制了该技术的广泛应用【7．8】。 为了加速植物细胞培养技术的商业化进程，有关工作人员一方面不断改进和优化 培养技术，如控制培养气相条件、加入活性成份诱导剂等：另一方面深入研究了 多种新的培养方式，如高密度培养、连续培养、固定化培养等，并开展了反应器 设计等方面的工作，以期得到更适合于植物细胞工业化生产的培养方法…11。20 世纪80年代成为该领域发展的黄金时期，取得了一系列重大突破。植物细胞大规 模培养用以生产次生代谢产物已成为生物工程的重要组成部分，并逐渐完善成为 一项通过次生代谢产物及其调控、细胞突变及其筛选等现代的生物工程手段，进 行工业化生产，以获得各种产品的新兴的跨学科技术【12彤】。 迄今，全世界已对近干种植物进行了细胞大规模培养研究，生产的天然产物 被应用到药品、香料、色素、食品、化妆品等500多种产品的研究开发当中【14】。 2 日本是最早利用这一技术的国家，1968年，古谷等利用130000L发酵罐进行了人 参细胞培养的工业化生产，结果表明，通过该方法得到的人参皂甙组成及药理活 性与亲本植株基本相同，而且皂甙含量为亲本植株的3倍，使植物细胞大规模培 养进入了工业化生产的实用阶段。1983年，日本学者首次进行了紫草细胞的大规 模培养并生产出紫草宁【15J，同年三井石油化学工业公司正式宣布把紫草宁作为染 料和药物进行工业化生产，1984年，添加紫草宁的生物口红正式投放市场。之后， 利用黄连细胞培养生产小蘖碱、长春花细胞生产阿吗碱的规模都达到了5000L， 长春花细胞培养生产蛇根碱和阿吗碱也进入了工业化阶段。德国也建立了由75L、 利用这些反应器培养了紫松果菊细胞，生产具有免疫活性的多糖【16‘17】。我国学者 L、10L、100 利用5 L气升式反应器对库叶红景天细胞进行培养，红景天苷产量 可达516umol／L，显示出工业化生产的可能性。利用倾斜式平板搅拌通气型生物 2 1 反应器悬浮培养水母雪莲细胞生产黄酮类物质，培养1 d，细胞干重达N3．8g／L， 黄酮产量为416mg／Ltl8。19】。此外，利用培养细胞进行生物转化也是生产次生代谢 产物的一条有效途径。在自然界，许多药用植物中的药用成份含量很低，但是一 些成份的生物合成前体却十分丰富。可通过在培养的细胞体系中加入这些药用成 份的前体，利用培养细胞中的酶系催化生产这些药用成份，该方法不仅专一性强， 而且耗能低、效率高。 尽管植物细胞大规模培养的成本相对较高，但是由于许多植物次生代谢产物 具有无可替代的效用，而且细胞培养对天然植物资源的依赖性较小，因而有着巨 大的市场需求和高昂的售价。成功的植物细胞培养既是解决天然植物资源匮乏、 活性成份不稳定等问题的有效途径，同时有着丰